جداسازی قطعات ( scFv ) آنتی بادی علیه گیرنده Fzd7 از کتابخانه آنتی بادی فاژی و بررسی عملکرد آن

Abstract

گیرنده Frizzeld Receptor(Fzd7) بر روی سلول های سرطانی سینه بیان شده و در متاستاز، بقا و تکثیر سلولهای سرطانی نقش دارد. امروزه، استفاده از مونوکلونال آنتی بادی هایی که Fzd7 را هدف قرار می دهند به صورت تنها یا در ترکیب با سایر داروها، یک روش امید بخش برای درمان سرطان سینه هستند. قطعات کوچک نواحی متغیر آنتی بادی (scFv: Single-chain fragment variable) به خاطر مزیت های فراوانی که نسبت به آنتی بادی های کامل دارند. به عنوان ابزار مناسبی برای هدف قرار دادن سلول های توموری معرفی شدند. از این رو ما از این قطعات برای درمان سرطان استفاده می کنیم.مواد و روش¬ها:در این مطالعه، ما از کتابخانه Library نیمه سنتتیک، Tomlinson استفاده کردیم. با فرآیند panningscFv های اختصاصی علیه اپی توپ خارج سلولی گیرنده Fzd7 را جداسازی کردیم. برای بررسی اختصاصیت این scFv های جداسازی شده از تکنیک های مختلفی از جمله الایزا پلی کلونال، الایزامونوکلونال، الایزا فاز محلول، کلونی PCR و سکانس ژن ها استفاده کردیم. در پایان برای ارزیابی عملکردی ( اثرات ضد تکثیری و آپوپتوزی) این قطعات جداسازی شده از روش MTT و Annexin V/PI استفاده کردیم.یافته‌ها:نتایج الایزا برای قطعات اختصاصی scFv های جداسازی شده از فرآیند panning نسبت به پپتید Fzd7 را تایید کرد، همچنین برای تایید نتایج الایزا PCR Colony انجام شد. آنالیز محصول PCR و بررسی سکانس ژن مشخص نمود که قطعات جداسازی شده مربوط به زنجیره های متغییر سبک و سنگین می باشد. بررسی این scFv های جداسازی شده مشخص کرد که این قطعات آنتی بادی موجب مهار رشد و القای آپوپتوز را در سلول های سرطانی می شوند., Wnt/-catenin signaling pathway through Frizzled receptors has been shown to play a key role in both normal development and tumorigenesis. Overexpression of Wnt pathway genes, such as Fzd7 in several malignancies is well-documented. Therefore, targeting of Fzd7 and its ligand inhibits cancer cells proliferation metastasis.Material and Methods: In the present study we isolated single chain variable fragments (scFvs) against Fzd7 receptor using phage display method. Semi-synthetic human naive antibody libraries (Tomlinson I + J) was employed in panning procedure to isolate specific scFv against specific peptide from extracellular domain of Fzd7 receptor. The reactivity and growth inhibition effects of the selected antibodies was evaluated using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)MTT and annexin V assays, respectivelySeven scFvs reactive to Fzd7 were selected following four rounds of panning. The results showed that the selected scFvs inhibits cell growth through apoptosis cell death in a triple negative breast cancer cells, MDA-MB-231. Given that Fzd7 and Wnt pathway plays a critical role in tumor progression, selected blocking scFvs represent significant potential for immunotherapy of breast cancer cells.