تأثیر داروی ضد سرطان Taxol بر بیان microRNAهای سرکوب کنندهی توموری در رده های سلولی سرطان سینه

Abstract

سرطان سینه شایع ترین نوع بدخیمی در بین زنان در کل دنیا می باشد که با توجه به اهمیت این بیماری در جامعه کنونی، پیشگیری، تشخیص به موقع و درمان موفقیت آمیز آن بسیار حائز اهمیت می باشد. داروی ضد سرطان Taxol از پرکاربردترین داروهای شیمیایی مورد استفاده در درمان سرطان سینه می باشد. با اینکه مکانیسم سلولی این دارو به خوبی شناخته شده است، ولی اطلاعات جامعی در مورد مکانیسم مولکولی این دارو در دست نمی باشد. microRNA ها از جمله عوامل مولکولی ای می باشند که اخیراً ارتباط آنها با سرطان سینه مشخص شده است. این مولکول ها به دو دسته ی انواع القا کننده ی توموری و انواع سرکوب کننده ی توموری تقسیم بندی می شوند. در مطالعه ی حاضر مکانیسم مولکولی داروی Taxol از نظر تأثیر بر بیان microRNA های سرکوب کننده ی توموری در سرطان سینه شامل Let-7a و miR-205 و نیز mRNA های هدف آنها در چهار رده سلولی از سرطان سینه شامل MCF-7، MDA-MB-231، SKBR3 و BT-474 مورد بررسی قرار گرفت.روش کار و مواد: در این مطالعه ابتدا چهار رده ی سلولی در محیط کشت RPMI1640 حاوی 10%FBS کشت داده شدند. در مرحله بعد IC50 مربوط به داروی Taxol در هر رده ی سلولی با استفاده از تست MTT محاسبه شد و در نهایت میزان بیان microRNA ها و نیز mRNA های هدف آنها در دو گروه غیر تیمار شده و تیمار شده با غلظت IC50 مربوطه با استفاده از تکنیک Real-Time RT PCR Quantitative اندازه گیری شد.یافته ها: طبق نتایج این مطالعه، در سه رده ی سلولی MCF-7، MDA-MB-231 و SKBR3 میزان بیان هر دو microRNA کاهش و در رده ی سلولی BT-474 افزایش یافت. همچنین نتایج سنجش میزان بیان mRNA های هدف این microRNA ها به این صورت بود که الگوی تغییر بیان mRNA مربوط به ژن HER3 بعنوان هدف miR-205 نتایج ما را تأیید کرد، اما الگوی تغییر بیان mRNA ی مربوط به ژن RAS بعنوان هدف Let-7a متناقض با نتایج حاصل از ارزیابی سطح بیان Let-7a بعنوان miRNA ی تنظیم گر آن بود., Breast cancer is the most frequently type of carcinoma among women in the world and prevalence of it is increasing severely. So, fast diagnosis and successful treatment is very important. Taxol is a chemotherapy drug with extensive application in breast cancer. Although the cellular mechanism of Taxol was recognized but there is no clear evidence in its molecular mechanism. MicroRNAs (miRNAs) are a noncoding group of RNAs which is associated with different types of cancer including breast cancer. MiRNAs associated with cancer are divided into two groups, tumor inducer miRNAs and tumor suppressor miRNAs. In this study we investigate the effect of Taxol on the expression level of two tumor suppressor miRNAs in breast cancer, let-7a and miR-205, and their targets, in four cell lines of breast cancer including MCF-7, MDA-MB-231, SKBR-3 and BT-474.Materials and methods: In this study all cell lines were cultured in RPMI1640 medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS). The IC50 of Taxol was determined for each cell line with MTT assay. Finally, Expression level of all miRNAs and mRNAs in each cell line pre and post treatment with Taxol were assessed using SYBR green-based quantitative real-time PCR.Results: our study demonstrated significant decrease in expression level of both miRNAs in cell lines MCF-7, MDA-MB-231 and SKBR-3 but increase in BT-474. The results from analysis of expression level of HER-3 was in reverse with the pattern of miR-205 expression, as the regulator of HER-3, so verified our results. But the pattern of alterations in expression level of K-RAS, as a target of let-7a was in contradictory with pattern of let-7a expression.