تاثیر ماده مومیایی بر میزان تکثیر کندروسیت ها و بیان ژن های COMP, Aggrecan, Sox-9 و کلاژن نوع II در شرایط کشت سه بعدی

Abstract

هدف از این مطالعه، بررسی تاثیر ماده مومیایی بر میزان تکثیر کندروسیت ها و بیان ژن های COMP, Aggrecan, Sox-9 و کلاژن نوع II در شرایط کشت سه بعدی می باشد. کندروسیت ها درپاساژ دوم درتراکم 1x106بصورت تک لایه و یا بر روی داربست PCL کشت شدند. سلولها درهردوشرایط به دو گروه کنترل (دریافت کننده محیط کشت) و تیمار شده باماده مومیایی درغلظت 500 وg/ml µ1000بهمدت 72 ساعت تقسیم شدند.بیان ژن های مختص بافت غضروف شامل کلاژنII،اگریکان،پروتئین ماتریس الیگومریک غضروف (COMP) وSox-9بااستفاده از تکنیکReal time RT-PCRانجام شد. توانایی ماده مومیایی به منظورافزایش تکثیرسلولهای غضروفی بااستفاده ازتکنیک MTT و Doubling timeموردبررسی قرارگرفت.بالاترین آهنگ تکثیرسلولهای غضروفی درغلظتg/ml µ1000بود.تیمارسلول های غضروفی باg/ml µ1000 ازماده مومیایی منجربه افزایش قابل توجهی دربیان ژن اگریکان،COMP وSox-9، درهردوشرایط کشت مونولایر وسه بعدی شد. بیان ژن درسلولهای غضروفی کشت شده برروی داربستPCLدرمقایسه با سلولهای کشت تک لایه، به طورقابل توجهی بالاتربود. , The aim of the study is to investigate the probable effects of Mummy on chondrocyte proliferation and expression of cartilage specific gene. Chondrocytes at the second passage were plated at density of 1x106 in monolayer or seeded onto PCL scaffolds. Cells in both conditions were divided into control (received medium) or treated with Mummy at concentrations of 500 and 1000 µg/ml for 72 hours. The gene expression profile of collagen II, aggrecan, cartilage oligomeric matrix protein (COMP) and sox-9 was evaluated using real-time RT-PCR. The ability of Mummy to enhance the proliferation of chondrocytes was further evaluated using doubling time and MTT technique.The highest proliferation rate of chondrocytes was found at a concentration of 1000µg/ml.Treatment of chondrocytes with 1000µg/ml of Mummy resulted in a significant increase in expression of Sox-9, COMP and Aggrecan genes in both monolayer and 3D culture conditions. Compared to the monolayer cultivated cells, expression of genes in seeded chondrocytes on PCL scaffolds was significantly higher.