اثر داروهای 5-آزاسیتیدین ، والپرویک اسید و نانوسامانه لیپیدی حاوی 5-آزاسیتیدین بر میزان بیان مهار کننده های تومور در رده سلولی mcf-7

Abstract

علاوه بر ژنتیک نقش اپی ژنتیک در روند سرطا¬¬¬¬¬نزایی و توسعه سرطان قابل اهمیت می¬باشد. عمده اثر اپی-ژنتیک برکاهش بیان مهار¬کننده های تومور و افزایش بیان انکوژن ها می¬¬¬¬¬¬¬¬¬باشد. در سالهای اخیر مطالعات بسیاری در رابطه با درمانهای مبتنی بر اپی¬ژنتیک انجام گرفته است، اولین داروی مبتنی بر مکانیسم های اپی ژنتیکی 5-آزاسیتیدین نام دارد. هر چند این دارو مؤثر است، ولی دارای محدودیت هایی می¬باشد، که بهینه سازی این دارو می¬تواند نتایج قابل توجهی داشته باشد. روش کار: پس از تیمار با داروی 5-آزاسیتیدن و والپرویک اسید به صورت جدا و ترکیبی بر روی رده سلولی MCF-7 مهار رشد با استفاده از تکنیک MTT تعیین شد و میزان بیان مهار کننده های تومور با استفاده از تکنیک RT-qPCR تعیین شد. سپس داروی 5-آزاسیتیدین در نانو ذرات لیپیدی بارگیری شد. ویژگی¬های این نانو ذرات مشخص شد، و میزان مهار رشد با استفاده از تکنیک MTT بررسی شد. و میزان بیان ژن با RT-qPCR تعیین شد. با رنگ آمیزی DAPI مورفولوژی سلولهای تیمار شده، مشاهده شد. همچنین با نشان دار کردن نانو ذرات لیپیدی با Rhodamine B نفوذ نانو ذرات به درون سلول MCF-7 مطالعه شد. یافته ها : تیمار ترکیبی سلولهای MCF-7 توسط دو دارو اثر ادیتیو بر میزان مهار رشد داشت. و فقط بیان RAR2 در تیمار همزمان با والپرویک اسید افزایش جزئی داشت. بارگیری داروی 5-آزاسیتیدین در نانو ذرات لیپیدی باعث افزایش میزان مهار رشد شد نانو سامانه های نشان دار شده با Rhodamine B مناسب بودن سایز و پتانسیل زتا برای ورود به سلول MCF-7 را نشان داد. میزان افزایش بیان مهار کننده های تومور تحت تیمار با 5-آزاسیتیدین بارگیری شده همانند 5-آزاسیتیدین آزاد بود., Beside genetics, epigenetics also have an important role on cancer generation and development. The main effect of epigenetic is on tumor suppressors silencing and oncogenes expression. In the recent years many studies was performed for medications according epigenetics. 5-azacytidine is first drug that targets epigenetic mechanism. Although this drug is effective, but it has some restrictions. Enhancement of this drug could have considerable results.METHOD: After treatment MCF-7 cells with 5-azacytidine and valproic acid in single and combination, cell survival were analysed with MTT assay, and tumor supressors expression were compared by RT-qPCR. Then 5-azacytidine was loaded in solid lipid nanoparticles. nanoparticles features were characterized.Then cell growth inhibition were studied by MTT assay, and tumor supressors expression were determined with RT-qPCR. Apoptosis of treated cells were detected by DAPI staining. The uptake of solid lipid nanoparticles were detected by Rhodamine B.RESULTS : Combination treatment of MCF-7 with valproic acid shows additive effect, the expression of RAR2 in combination with 5-azacytidin shows insignicant increase. Encapsulation of 5-azacytidinein solid lipid nanoparticles increase growth inhibition rate. Apoptosis was detected in treated clles, Rhodamine B labeled SLNs show particle size and zeta potential of particles is suitable to entrance in MCF-7 cells. RT-qPCR does not show any significant difference in expression in both cells treated with free or encapsulated drug.