مکانیسم احتمالی اثرLPG3 لیشمانیا ماژور در فعال کردن لنفوسیت هایT خالص شده انسانی از طریق تحریک TLR2

Abstract

لیشمانیازیس یکی از شایع ترین بیماری های عفونی است که بوسیله انگل درون سلولی اجباری لیشمانیا ایجاد می شود. به دلیل اینکه تاکنون واکسن موثری برای لیشمانیازیس طراحی نشده، ترکیبات جدیدی که سیستم ایمنی میزبان را تحریک کنند، می توانند موجب تقویت پاسخ های ایمنی مصونیت بخش علیه این انگل شوند. لیپوفسفوگلیکان 3 (LPG3) یک پروتئین حیاتی در سنتز و سرهم بندی LPG است. در این مطالعه، توانایی LPG3 نوترکیب و قطعات آن در فعال سازی سلول های T انسانی خالص شده و همچنین ترشح سایتوکاین در آزمایشگاه (in vitro) مورد بررسی قرار گرفت.روش کار و مواد: در این پژوهش از 10 فرد بالغ سالم، بدون سابقه ابتلا به بیماری لیشمانیازیس خونگیری صورت گرفت. پس از جداسازی سلول های تک هسته ای خون (PBMC)، لنفوسیت های T به کمک نانوذرات مغناطیسی جدا شد. سپس با غلظت های 2، 10 و 20 g/ml از پروتئین LPG3 و قطعات آن (N و C ترمینال)، در حضور و عدم حضور آنتی بادی بلوکان ضد گیرنده شبه تول2 (TLR2) کشت داده شد. در نهایت میزان بیان ژن فاکتور های رونویسی (T-bet، GATA3 و RORT)، ترشح و بیان ژن سایتوکاین های اینترفرون گاما، اینترلوکین-4 و اینترلوکین-17A (IFN-، IL-4 و IL-17A) به روش Real time PCR و ELISA و همچنین میزان بیان مارکر فعالیت با روش فلوسایتومتری مورد بررسی قرار گرفت.یافته ها: نتایج این تحقیق نشان داد که پروتئین نوترکیب LPG3 و قطعه NT آن، باعث بیان افزایش یافته CD69 بر سطح سلول های T و القای تمایز لنفوسیت های T CD4+ به سمت فنوتیپ T کمکی 1 (Th1) می شود. همچنین مشخص شد که افزایش بیان IFN- از مسیر مستقل از TLR2 پیام رسانی می گردد., Leishmaniasis is one of the most common infectious diseases transmitted by an obligate intracellular genus Leishmania. As there is no efficient vaccination strategy for leishmaniasis, new immunostimulatory components may enhance protective immune responses against this parasite. Lipophosphoglycan 3 (LPG3) is an essential protein required for LPG assembling. In this study, the ability of recombinant LPG3 (rLPG) and its fragments to activate isolated healthy human T-cells and cytokine secretion was evaluated in vitro.Material and Methods: The heparinized peripheral blood samples were collected from 10 adult healthy volunteers with no history of Leishmania infection after obtaining their informed consent. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were isolated by density gradient centrifugation on Ficoll–Paque from whole blood. Purified T cells were co-incubated with recombinant LPG3, NT-LPG3 and CT-LPG3 fragments in the presenc or absence of anti-TLR2. Then, we evaluated the expression level of transcription factors (T-bet, GATA3 and RORT), the expression and secretion of cytokines (IFN-, IL-4 and IL-17A) using Real-time PCR and ELISA. The capability of recombinant Leishmania LPG3 and its fragments in the activation of T cells was assessed by CD69 expression.Results: The results showed that rLPG3 and its N-terminal fragment (rNT-LPG3) enhanced expression of CD69 on the surface of T-cells and promoted differentiation of CD4+ T-lymphocytes toward a T-helper 1 (TH1) phenotype, in part, through up-regulation of interferon (IFN)- expression in a TLR2-independent manner.