اثرات Omega3 بر بیان رسپتورهای پروژسترونی و HAS2 در سلولهای کومولوس و میزان لقاح اووسیت

Abstract

Introduction: Omega-3 fatty acids can modify gene expression and protein synthesis through altering the function of transcription factors controlling gene expression. Cumulus expansion, is a critical process for normal oocyte development, ovulation, and fertilization. This event needs synthesis of hyaluronic acid and production of that is controlled by the enzyme hyaluronic acid synthase 2 (HAS2).Also PGR is necessary for normal expansion. The aim of present study was to determine if Omega-3 can affect expression of HAS2 and PGR in Cumulus cells and its consequences outcome of the in vitro fertilization. Material and method: For this purpose, 30 female and 5 male mice were used.After super ovulation, COCs were collected from oviduct by flashing method.In experimental1group: surrounding cumulus cells were removed by using 20 hyaluronidaseand then were cultured in200 l universal medium supplemented with 20 omega-3 for 6 hrs. Control 1group: was treated same as experimental group except for addition of omega-3 into culture media. In both experimental and control 2groups:COCswere cultured in relevant medium for each group for 6 hrs. The cumulus cells and COCs were stored at nitrogen liquid until real-time PCR. PCR was performed by using a master mix containing CYBR green. The mRNA level of HAS2 andPGRwas evaluated. For the IVF the sperms were added to the medium drops containing COCs. Embryo formation was considered as a success in fertility rate and compared with control group usingT- Test. Result: The result showed that the level of expression of HAS2andPGRin experimental groups comparing with controls was significantly increased(p0.05)and the number of embryo formationin experimental groups was increased., هدف از بررسی حاضر، یافتن اثرات omega-3بر بیان رسپتور پروژسترون وآنزیمHAS2 تولید شده توسط سلولهای کومولوس می باشد. مواد وروش ها:در این بررسی از 30 موش سوری ماده و 5 موش نر استفاده شد. موش های ماده بعد از تحریک تخمک گذاری کشته شده و کمپلکس های کومولوس-اووسیت( COCs )به روش فلاشینگ از لوله رحم جمع آوری شدند. در گروه آزمایش 1: سلول های کومولوس با استفاده ازآنزیم هیالورونیداز جدا شده و در 200 سی سی محیط کشت universal که حاوی 20لاندا ایکوزاپنتانوئیک اسید است در حدود 6 ساعت کشت شدند. گروه کنترل 1: به همان روش کشت داده شد با این تفاوت که محیط کشت فاقد امگا-3 بود. در گروهای آزمایش و کنترل2: COCsبه دو روش قبلی در محیط های کشت مزبور به مدت 6 ساعت کشت داده شدند. COCs و سلول های کومولوس ایزوله شده در تانک ازت تا زمان انجام Real-time RT PCR نگهداری شدندPCR با استفاده از master mix حاوی CYBR green انجام گرفت و سطح بیان HAS2و PGR در هر 4 گروه ارزیابی شد. برای انجام IVF اسپرم ها پس از آماده سازی به محیط کشت حاوی COCs اضافه شدند و شمارش جنین ها به عنوان ارزیابی درصد لقاح در نظر گرفته شدوبا گروه کنترل با استفاده از T-Test مقایسه شد.نتایج:نتایج حاصل از بررسی حاضرنشان داد که سطح بیان ژن های HAS2و PGR در گروه های آزمایش نسبت به کنترل خودشان افزایش نشان دادند و تعداد جنین های تشکیل شده درطی پروسه لقاح آزمایشگاهی (IVF) درگروه آزمایش نسبت به گروه کنترل بالابود