طراحی زیست حسگر الکتروشیمیایی مبتنی بر شبکه لیپوزومی برای شناسایی فعالیت آنزیم تلومراز در سلول های سرطانی
چکیده
تلومراز به عنوان تومورمارکری مهم برای تشخیص اولیه سرطان در نظر گرفته میشود. در مطالعه حاضر از تکنیک الکتروشیمیایی مبتنی بر تقویت سیگنال لیپوزومی ارائه شده است که شناسایی آنزیم تلومراز استخراج شده از سلول¬های 549A را به صورت ساده، بدون نیاز به PCR و با حساسیت بالا مقدور می¬سازد.روش¬ها: در این استراتژی محصولات واکنش تلومرازی، که در سطح میکروپلیت پوشیده از استرپتاویدین تثبیت شده¬اند، با پروب¬های به دام اندازنده بیوتین دار هیبرید می¬شوند. سپس لیپوزوم¬های بیوتین دار حاوی دوپامین، به استرپتاویدین¬هایی که در مرحله ای مجزا به قسمت بیوتین دار پروب¬های به دام اندازنده متصل شده¬اند، کنژوگه می¬شوند. در نهایت این لیپوزوم¬ها توسط متانول تخریب، و دوپامین آزاد شده توسط روش ولتامتری پالس تفاضلی و به وسیله الکترود گلسی کربن اصلاح شده با نانولوله¬های کربنی اندازه گرفته می¬شود.نتایج: با استفاده از این روش، فعالیت آنزیم تلومرازی استخراج شده از 10 سلول سرطانی کشت داده شده قابل شناسایی بود (18/13% :RSD). ,
Telomerase is considered as an important tumor marker for early cancer diagnostics. In the present study, an electrochemical method based on liposomal signal amplification platform is proposed for simple, PCR-free, and highly sensitive detection of human telomerase activity, extracted from A549 cells.Methods: In this strategy, telomerase reaction products, which immobilized on streptavidin coated microplate, hybridized with biotinylated capture probes. Then, dopamine-loaded biotinylated liposomes are attached through streptavidin to biotinylated capture probes. Finally, liposomes are ruptured by methanol and the released-dopamine is subsequently measured using differential pulse voltammetry technique by multi-walled carbon nanotubes modified glassy carbon electrode. Results: Using this strategy, the telomerase activity extracted from 10 cultured cancer cells could be detected.