تعیین گونه‌صهای سارکوسیستیس جدا شده از گوسفندان در کشتارگاه تبریز به روش PCR- RFLP
Abstract
Abstract Introduction The genus Sarcocystis is composed of about 130 species of Heteroxenous cyst-forming coccidia with differences in life cycle and pathogenicity. Sarcocystosis is caused by species of Sarcocystis, an intracellular protozoan parasite in the phylum Apicomplexa. In this study, heart and diaphragm muscles of sheep were collected from Tabriz abattoir and assessed for the presence of Sarcocystis species using methods of impression smear, tissue digestion, and PCR-RFLP techniques. Materials and Methods: in the present study 120 specimens from the diaphragm and heart muscles were collected.60 specimens contained macroscopic Sarcocystis cysts and the next 60 contained microscopic Sarcocystis cysts. Microscopic cysts was identified by preparation of direct tissue impression smears from samples and staining them by Giemsa stain and digestion of samples by pepsin and finally centrifugation and preparation of smear from the sediment and staining them with Giemsa stain and microscopically examined for presence of bradyzoit. DNA extraction was carried out by a kit. PCR conditions were optimized for 18S rRNA amplification. According to the position of restriction sites, restricted enzymes TAG1 were selected. Result: We observed the microscopic cysts in 40 % of impression smears and 100% of tissue digestions. RFLP-PCR analysis showed that macroscopic cysts and microscopic cysts belonged to Sarcocystis gigantea and Sarcocystis arieticanis, Sarcocystis tenella respectively.,
مقدمه: سارکوسیستیس حدودا از 130 گونه هتروگزنوز تشکیل شده است که از کوکسیدیاهای تشکیل‌صدهنده کیست با چرخه‌صزندگی و بیماریزایی متفاوت میصباشند. سارکوسیستوزیس بوسیله‌صی گونه‌صهای سارکوسیستیس ایجاد میصشود که از انگل‌صهای تک-یاخته‌صی داخل سلولی بوده و متعلق به شاخه اپیصکمپلکس‌صها هستند. در این مطالعه عضلات قلب و دیافراگم از گوسفندان کشتار شده در کشتارگاه تبریز جمع‌صآوری شد و وجود گونه-های سارکوسیستیس با استفاده از روش‌صهای گسترش مهری و هضم بافتی و روش PCR-RFLP تعیین گردید. مواد و روش کار: مجموعا 120 نمونه بافتی از عضلات قلب و دیافراگم جمع‌صآوری شد که 60 نمونه آن حاوی کیست‌صهای میکروسکوپی و 60 نمونه آن حاوی کیست‌صهای ماکروسکوپی بود. کیست‌صهای میکروسکوپی به وسیله تهیه گسترش مستقیم بافتی (گسترش مهری) از نمونه‌صها و رنگ‌صآمیزی آنها به‌صوسیله‌صی رنگ گیمسا و هضم نمونه‌صها به وسیله‌صی پپسین و در نهایت سانتریفیوژ و تهیه گسترش از رسوب و رنگ‌صآمیزی آن با رنگ گیمسا و مشاهده برادیصزوئیتها در زیر میکروسکوپ تشخیص داده شدند. تخلیص DNAبا استفاده از کیت صورت گرفت. شرایط PCR برای تکثیر قطعه 18s rRNA بهینه‌صسازی شد. با توجه به محل برش، آنزیم محدودصکننده TAG1 انتخاب شد. نتایج: کیست‌صهای میکروسکوپی در 40صدرصد گسترش‌صهای بافتی و در 100صدرصد هضم بافتی مشاهده شدند. ارزیابی PCR-RFLP نشان داد که کیست‌صهای ماکروسکوپی و کیست-های میکروسکوپی به ترتیب متعلق به سارکوسیستیس ژیگا نته‌صآ و سارکوسیستیس آریتیصکنیس و سارکوسیستیس تنلا است.