سرکوب بیان ژن مقاومت داروییMDR1(ABCB1) توسط RNA مداخله گر کوچک (siRNA)و بررسی مقاومت دارویی در رده سلولی (sw480)مدل سرطان کولون انسانی مقاوم به داروی Oxaliplatin

Abstract

Multidrug resistance, the principal mechanism by which many cancers develop resistance to chemotherapy drugs, is a major factor in the failure of many forms of chemotherapy. The multidrug resistance gene1 (MDR1/ABCB1) product, p-glycoprotein (P-gp), pump out a variety of anticancer agents from the cell, giving rise to a general drug resistance against chemotherapeutic agents. One of the most challenging aspects of colon cancer therapy is rapid acquisition of multidrug resistant phenotype. Silencing of MDR1/ ABCB1 gene expression with small interfering RNA (siRNA) could be an attractive approach to overcome multidrug resistance of cancer. Materials and methods: SW480 cells were made resistant. Resistance cell(oxaliplatin-resistant SW480) were transfected with specific MDR1 siRNA. Relative MDR1 mRNA expression was measured by Quantitative real-time PCR. Western blot analysis was performed to determine the protein levels of P-gp. The cytotoxic effects of oxaliplatin and MDR1 siRNA, alone and in combination were assessed using MTT and the number of apoptotic cells was determined with the TUNEL assay. Results: In the oxaliplatin-resistant SW480 after transfection with siRNA MDR1,MDR1 siRNA effectively reduced MDR1 expression in both mRNA and protein levels as well asMDR1 down-regulation synergistically increased the cytotoxic effects of oxaliplatin and spontaneous apoptosis, هدف اصلی در این مطالعه بررسیاثرRNAمداخلهگر کوچک siRNA) (اختصاصی MDR1درسلول های سرطان روده انسان ( sw480 مقاوم در برابر oxaliplatin ) و افزایش حساسیت سلول مذکور به دارو می باشد.روش کار و مواد :سلولهای سرطانکولون انسان (sw480) را با داروی oxaliplatinمقاوم نموده و سپس siRNA به داخل سلول های SW480 مقاوم شده به دارو انتقال داده شد. سطح بیان mRNAاز طریق QPCRو میزان پروتئین از طریق وسترن بلاتاندازه گیری گردیدند. میزان افزایش حساسیت به دارو از طریق آزمایش MTT و اثر کشندگی دارو توسط آزمایشTunel اندازه گیری شد. یافته ها: در سلول هایsw480مقاوم شده به داروی oxalipltin با انتقال siRNAMDR1، بیان ژن MDR1و بیان گلیکوپروتئین pکاهش یافتند، همچنین کاهش بیان MDR1 به طور سینرژستیک منجر به افزایش حساس شدن سلول ها به داروی oxaliplatin و در نتیجه افزایش میزان آپوپتوز گردید.