اثرات Clofarabineدر القای آپوپتوز و میزان بیان ژن p53R2 در رده سلولی T47D سرطان پستان

Abstract

Purpose: in this study we investigate the effect of clofarabine in induction of apoptosis in P53R2 expression and apoptosis in T47D breast cancer cell line. Material and method: T47D cell line was treated with different clofarabine concentration in three time: 24, 48 and 72h. Then by MTT-assay the IC50 of clofarabine was determined. Cells was divided to two groups: control and treated group and then total RNA of them was extracted and their cDNA was built by Reverse Transcriptase enzyme. Then Real Time PCR was done. Data from treated group and control was compared and their different was emerged. For apoptosis investigation, after treatment with clofarabine, the Annexine V and PI was used to detection of apoptosis and then by flowcytometry, the apoptotic and necrotic cells were evaluated. Result: After MTT assay, IC50 for 48 and 72h was determined as 3 and 2.5إM respectively and the 24h treatment hasnt cytotoxicity on these cells. The result of Real Time PCR showed that clofarabine induced p53R2 expression to 3.84 and 8.4 after treatment of 24h with IC50 of 48h and 72h respectively. Moreover, it induced p53R2 expression to 28.24 and 18.76 after treatment of 48h with IC50 of 48h and 72h respectively. Finally, clofarabine increased p53R2 expression to 61.39 and 76.1 after treatment of 72h with IC50 of 48h and 72h respectively. Also the result of flowcytometry has shown 13.45 and 37.2 percent apoptosis induction for 48 and 72h treatment, هدف: در این مطالعه اثرات کلوفارابین در القای آپاپتوز و بیان ژن P53R2 در رده سلولی سرطان پستان (T47D) بررسی میصشود. روش‌صها: رده سلولی سرطان پستان با رقت‌صصهای مختلف کلوفارابین در سه زمان 24, 48 و 72 ساعت تیمار شد و با استفاده از روش MTT , IC50 دارو مشخص گردید. سلول‌صها را به دو گروه کنترل و تیمار تقسیم کرده و تعداد مشخصی از آنها را با مقادیر مشخصی از کلوفارابین تیمار کرده و RNA توتال آنها را استخراج کرده و cDNA آنها با استفاده از آنزیمReverse Transcriptase ساخته شد. سپس روی cDNA سنتز شده Real Time-PCR انجام شد. دادههای گروه کنترل و تیمار با هم مقایسه شده و تفاوت آنها مشخص گردید. جهت بررسی آپاپتوز بعد از تیمار با کلوفارابین از روش Annexin V و پروپدیوم یدید (PI) استفاده شد و با دستگاه فلوسایتومتری میزان سلول‌صهای آپاپتوزی و نکروزی و زنده ارزیابی گردید. یافتهها: پس از انجام MTT, IC50 کلوفارابین برای تیمار 48 ساعته إM3 و تیمار72ساعته إM5/2 بود. این دارو در زمان 24 ساعته اثر کشندگی بر روی این رده سلولی نداشت. نتایج حاصل از Real Time-PCR نشان دهنده افزایش بیان84/3 و4/8 برابری, 24 ساعت بعد از تیمار با غلظت‌صهای IC50 معادل 48 ساعته و 72 ساعته بود. افزایش بیان 24/28 و 76/18 برابری, 48 ساعت بعد از تیمار با غلظت-های IC50 معادل 48 و 72 ساعته مشاهده گردید. نهایتا افزایش بیان 1/76 و 39/61 برابری, 72 ساعت بعد از تیمار با غلظت‌صهای IC50 معادل 48 و 72 ساعته مشاهده گردید. همچنین نتایج حاصل از فلوسایتومتری القای آپاپتوز را برای زمان های تیمار 48 و 72 ساعته به ترتیب 45/13 و 2/37 درصد نشان داد