تاثیر بیان miR124وmiR128 بر القای تمایز عصبی سلولهای بنیادی پرتوان القا شده

Abstract

Objectives: Herein we differentiate iPS cells to neurons by miR-124 and miR-128 which are two brain-enriched miRNAs with different expression time points. Methods: After miR-124 and miR-128 cloned in Lenitiviral vectors underwent viral production, they were transduced to iPSCells both separately and sequentially. Morphological changes were assessed by fluorescent microscopy because plasmids contained GFP .vx3243The quantitation of miRNA expression and the expression profile of neural marker genes was detected by q-RT- PCR. Immunocytochemical analysis performed to evaluate neural proteins. Results:A comparison between our findings indicates the synergistic effect of mir-124 and miR-128 in neural differentiation of iPScells. After 16 days of differentiation, neural like characteristics of our cells were confirmed transcriptionaly by overexpressing NSE, beta-tubulin, Nestin, Map2, and BDNF and translationaly by NSE and beta-tubulin over expression. Long projections of cells observed after differentiation reminds neural like cells., در این تحقیق با انتقالmiR124و miR128در سلول های iPSانسانی تاثیر بیان انفرادی وهمزمان آنها درالقاءتمایز به سلول های عصبی بررسی گردید. به این منظور miR128 و miR124کلون شده به درون وکتور لنتی ویروسی را پس از تولید ذرات ویروسی ،به صورت جداگانه و متوالی به سلول های iPSانسانی منتقل کردیم. به دلیل وجود ژنGFPدر پلاسمیدها بررسیهای مورفولوژیکی با میکروسکوپ فلورسانت انجام شد،میزان بیانmiRNA هاو تعیین پروفایل بیانی مارکرهای اختصاصی عصبی با qRT-PCR ارزیابی شد.آزمایشات ایمونوسیتوشیمی جهت مشاهده بیان پروتئین های عصبی به کار برده شد. مقایسه نتایج مبتنی براثر سینرژیسم دو miRNA در تمایز عصبی سلول های iPSاست.طی تمایز 16روزه در سطح رونویسی با افزایش بیان ژنهای عصبی beta-Tubulin،Map2 ، NSE BDNF،وکاهش بیان NESTIN و در سطح ترجمه با افزایش بیان پروتئین beta-Tubulinو NSE خصوصیات سلول های شبه نورونی تایید گردید. زوائد بلند سلولی در بررسیهای مورفولوژیک بیانگر تمایز عصبی بود.