مقایسه روشهای PCRRFLP با روش نسبی در تعیین مقاومت دارویی سویه های مایکوباکتریوم توبر کلوزیس نسبت به ایزونیازید

Abstract

in present study we have evaluated the diagnostic value of PCR-RFLP on katG gene and proportion method for determination of isoniazid resistance in Mycobacterium tuberculosis isolates. Materials and Methods A total of 25 susceptible and 25 isoniazid resistant Mycobacterium tuberculosis isolated in Tuberculosis and Pulmonary Diseases Research Center of Tabriz were subjected to study. Minimal inhibitory concentration of isolates against isoniazid was performed by proportion method according to CLSI method. Extracted DNA from Mycobacterium tuberculosis isolates was subjected to amplify the KatG gene region by using specific primers. Then the PCR products were digested with MspI restriction endonuclease in order to detect the mutations in that region. DNA sequencing was used for confirmation of PCR-RFLP results. Results A total of 50 isolates were included in this study, which 28 isolates (56%) was from males and 22 isolates (44%) was from females. The age of patients ranged from 23-63 years with the mean age of 49.92 years. All the isoniazid resistant isolates were resistant to 0.2 g/ml concentration of isoniazid. In PCR experiment over all we found mutation in 19 out of 25 (76%) isolate in specific region of KatG gene. While in 6 isolates (24%) there was no mutation and they showed the same RFLP pattern as susceptible isolates, در مطالعه حاضر ارزش تشخیصی روشهای PCR-RFLP و نسبی در تعیین مقاومت داروئی سویه های مایکوباکتریوم توبرکلوزیس نسبت به ایزونیازید مورد بررسی قرار گرفته است. مواد و روشهاتعداد 25 سویه حساس به ایزونیازید و 25 سویه مقاوم به ایزونیازید مایکوباکتریوم توبرکلوزیس، ایزوله شده در مرکز تحقیقات سل و بیماریهای ریوی تبریز مورد بررسی قرار گرفت. تعیین MIC نسبت به ایزونیازید به روش نسبی انجام شد وبه منظور بررسی وجود موتاسیون در ژن katG پس از استخراجDNA با استفاده از پرایمرهای اختصاصی تکثیر ژن katG انجام شد. سپس با استفاده از برش آنزیمی محصول PCR (PCR-RFLP) با آنزیم MspI وجود موتاسیون بررسی شد. جهت تائید وجود موتاسیون از تکنیک تعیین توالی استفاده شد. نتایج از تعداد 50 بیمار مورد مطالعه 28 نفر (56%) را افراد مذکر و22 نفر (44%) را افراد مونث تشکیل می دادند. محدوده سنی بیماران 63-23 سال بود و میانگین سنی بیماران 92/49 سال بود. تمامی سویه های مقاوم به ایزونیازید نسبت به غلظت g/ml 2/. ایزونیازید مقاوم بودند. در بررسی مولکولی نیز از مجموع 25 سویه مقاوم در 19 سویه (76%) موتاسیون در نواحی خاصی از ژن katG، مشاهده شد. در صورتیکه در 6 سویه (24%) هیچگونه موتاسیونی مشاهده نشد و الگوی برش آنزیمی آنها مشابه سویه های حساس به ایزونیازید بود.