ردیابی ژن ECM33 در آسپیرژیلوس نیجر و طراحی یک سازه ژنی جهت تخریب عملکرد ژن کد کننده پروتئین ECM33
Abstract
هدف از این مطالعه شناسائی،کلون نمودن و ساخت سازه ژنی برای تخریب عملکرد ژن ECM33 آسپپرژیلوس نیجر و همچنین بررسی نحوه بیان آن در حین رشد بوده است.ابتدا توالی کامل ژن ECM33 آسپپرژیلوس نیجربه همراه توالی نواحی کناری آن با استفاده از روشهای بیوانفورماتیکی بدست آمد و متعاقبابا روش PCR قطعه ژنومی تکثیر و کلون گردید.سپس با استفاده از روشهای مرسوم مهندسی ژنتیک بخش اعظم توالی رمز کننده این ژن از قطعه کلون شده حذف و توالی کد کننده مارکر انتخابی هایگرومایسین جایگزین آن گردید. در نتیجه در سازه تهیه شده ژن ECM33 عملا حذف شده با این وصف که وجود توالی های کناری نوترکیبی همسان را تسهیل می نماید. بیان ژن ECMM33 با استفاده از روش RTPCR مورد آنالیز قرار گرفت.ژن ECM33 بطور bp همراه با نواحی کناری آن به شکل یک قطعه kb کلون شد.آنالیز بیوانفورماتیکی توالی ژنومی و یافته های تجربی وجود دو اینترون در این ژن را به اثبات رساند.پروتئین ECM33 حاوی اسید آمینه با یکسانی حدود درصد با پروتئین های هم خانواده خود در سایر آسپرژیلوس ها می باشد.در این بررسی ها نشان داده شد که 1327ذکور در شرایط مختلف بطور مداوم بیان می گردد. سازه ژنی طراحی شده 52ز با روش های هضم آنزیمی،PCR و تعیین توالی تایید گردید