بررسی تاثیر مهار LncRNA-BCYRN1 بر روی بیان ژن انکوژنیک KRAS و تکثیر سلول-های سرطانی معده

Abstract

سرطان یک بیماری ژنتیکی در سلول های پیکری، به دلیل تقسیم سلولی غیرطبیعی یا از دست رفتگی مرگ طبیعی سلول (آپوپتوز) می باشد. سرطان امروزه پس از بیماری های قلبی عروقی به عنوان دومین عامل مرگ و میر شناخته می شود. سرطان معده یکی از کشنده ترین انواع سرطان ها در سراسر جهان است که به عنوان چهارمین سرطان شایع و دومین عامل مرگ بر اثر سرطان در جهان شناخته می¬شود. دو ژنی که در مطالعات اخیر در زمینه سرطان های بدخیم توجه محققان را به خود جلب کرده BCYRN1 و KRAS است. هدف از مطالعه حاضر بررسی میزان بیان ژن¬های در بیماران مبتلا به سرطان معده و تاثیر سرکوب BCYRN1 بر بیان ژن KRAS و تکثیر سلولی بود. مواد و روش¬ها: در مطالعه حاضر 25 بافت توموری و بافت غیر توموری مجاور از بیماران مبتلا به سرطان معده جمع آوری شد. پس از استخراج RNA و سنتز cDNA از نمونه¬های بافتی، میزان بیان ژن¬های KRAS و BCYRN1 با استفاده از تکنیک Real-Time PCR بررسی شد. در ادامه سلول¬های سرطانی معده AGS کشت داده شده و سپس غلظت¬های مختلف siRNA ضدBCYRN1 توسط الکتروپوریشن ترانسفکت شد. سپس تاثیر ترانسفکشن بر روی میزان بیان ژن¬های KRAS و BCYRN1 و همچنین ژن-های آپوپتوزی مورد بررسی قرار گرفت. در نهایت میزان تکثیر سلول های سرطانی معده ترانسفکت شده از روش MTT استفاده شد. نتایج: میزان بیان ژن¬های BCYRN1 و KRAS در بافت سرطانی معده بطور معنی داری نسبت به بافت مجاور غیر سرطانی افزایش پیدا کرد. پس از ترانسفکشن siRNA ضد OIP5-AS1 به سلول¬های سرطانی، بیان ژن BCYRN1 بطور معنی داری کاهش یافت؛ در ادامه بیان ژن KRAS در سلول¬های سرطانی ترانسفکت شده با کاهش معنی دار همراه بود. همچنین میزان بیان ژن¬های القاء کننده آپوپتوز در سلول¬های سرطانی ترانسفکت شده بطور معنی داری افزایش یافت؛ در حالی که میزان بیان ژن مهار کننده آپوپتوز در سلول¬های سرطانی ترانسفکت شده بطور معنی داری کاهش یافت. بررسی بقاء سلولی نشان داد که سرکوب بیان ژن BCYRN1، بقاء سلول¬های سرطانی معده را بطور وابسته به دوز و زمان کاهش می¬دهد.