بررسی نقش microRNAs مشتق شده از ریزذرات پودوسیت ها در تشخیص نفروپاتی غشایی

Abstract

نفروپاتی غشایی (MGN) از بیماری کلیوی التهابی شایع می باشد که با آسیب پودوسیتی و پروتئینوری همراه است. تنها روش تشخیصی دقیق این بیماری ، بیوپسی می باشد که یک روش تهاجمی هست. استفاده از بیومارکر های اختصاصی ریز ذرات (MPs) جدا شده از پودوسیت های آسیب دیده که در ادرار فرد بیمار آزاد شده اند، به عنوان یک روش تشخیصی زودهنگام ،غیر تهاجمی و قابل تکرار پیشنهاد شده است. با توجه به درگیری microRNA ها در آسیب پودوسیت ها، هدف مطالعه استخراج MPs موجود در ادرار افراد بیمار و تعیین اختصاصیت و بررسی سطح بیان miR-30c، miR-135 و miR-186 در نمونه ریز ذرات جدا شده از ادرار بیماران مبتلا به MGN بود. روش کار و مواد: نمونه ادرار 30 نفر از بیماران مبتلا به نفروپاتی غشایی و 16فرد سالم برای استخراج MPs ادراری با استفاده از اولتراسانتریفیوژ، جمع آوری گردید. تعیین اختصاصیت این ذرات با استفاده از مارکر پروتئینی اختصاصی MPs، TSG-101 و مارکر اختصاصی پودوسیت Nephrinبه روش وسترن بلات انجام شد و جهت بررسی اندازه و موفولوژی از میکروسکوپ الکترونیSEM استفاده شد.ارزیابی سطح بیان میکروRNA های استخراج شده از MPs ادراری miR-30c، miR-135 و miR-186 نیز توسط روش Real time PCR انجام شد. یافته ها: ارزیابی خصوصیات MPs نشان داد که ذرات متعددی با اندازه بیش از 100 نانومتر در نمونه ادرار می باشد و سطوح بالاتری از مارکر اختصاصی TSG-101و Nephrinدر نمونه‌های ادرار بیماران MGN در مقایسه با نمونه‌های کنترل وجود دارد(به ترتیبP<0.001 و P<0.001. میزان بیان miR-186 هم بین دو گروه مورد مطالعه مقایسه شد و بر اساس نتایج بیان این miRNA در گروه بیماران نفروپاتی غشایی نسبت به گروه افراد سالم افزایش بیان معنی داری دارد (به ترتیب 0.000=P ).