تعیین پروفایل بیان ژنی برخی از فاکتورهای رشد در سلولهای مزانشیم انسانی مشتق شده از مغز استخوان در کشت با لیزات پلاکتی

Abstract

در دهه ی اخیر پيوند سلول‌های بنيادي به دلیل موفقیت های چشمگیری که در درمان بیماری های مختلف از جمله سرطان‌ها، کم‌خونی‌ها، بدخیمی‌های خونی و اختلالات سيستم ايمني داشتند بسیار مورد توجه پژوهشگران حوزه ی درمان قرار گرفتند. سلول‌‌‌های بنیادی مزانشیمی از منابع متعددی مانند مغز استخوان ، بافت چربی ریه کبد جنین ، مایع آمنیوتیک .... به دست می‌‌‌آیند برداشت این سلول‌‌‌ها از بدن افراد راحت بوده و با حداقل عوارض همراه است، به همین علت به عنوان منبع سلولی مناسب همواره مورد توجه پژوهشگران حوزه درمان بوده‌‌‌اند. سلول های بنیادی مزانشیمی به واسطه فاکتور های مترشحه و ارتباط سلول به سلول در فرآیندهای متعددی ازجمله ترمیم بافت، تنظیم سلول‌های سیستم ایمنی، مهار واکنش پیوند برعلیه میزبان (GVHD)، کاهش پاسخ التهابی و ... نقش دارند. فاکتورهای رشد و سایتوکاین های ترشح شده از MSC همچنین نقش بسیار مهمی در خون‌سازی، تکثیر و تمایز سلول‌های خونی وسایر خواص درمانی مشاهده شده پس از پیوند را دارند. اگرچه نگرانی و تناقضات زیادی در استفاده ی کلینیکی از آنها در سلول درمانی وجود دارد . مهمترین نگرانی هتروژن بودن جمعیت های سلول های مزانشیمی است که ممکن است مواد ترشحی و یا پروفایل رونویسی آنها بسته به ترکیبات موجود در محیط کشت، پروتوکل جداسازی ، همچنین اهداء کننده و یا بافتی که سلول از آن جداشده باهم متفاوت باشند. تا به حال مطالعه‌ای در مورد بیان ژنی فاکتور های مترشحه از سلول مزانشیمی با منشاء مغز استخوان در کشت کنار لیزات پلاکت با تفسیر واضحی انجام نشده است.

مواد و روش ها : برای انجام این مطالعه ابتدا با توجه به اینکه به طور سنتی از FBS ( سرم جنین گاوی) در کشت سلول استفاده می شد و به دلیل گزارشاتی مبتنی بر واکنشهای التهابی سیستم ایمنی بر علیه سرم حیوانی از عصاره لیز پلاکتی به عنوان جایگزین جهت بهینه سازی محیط کشت و جلوگیری از رخداد فوق استفاده شد. سپس بیان ژنی فاکتور های رشد و سایتوکاین هایی مثل : SDF1,FGF2,CCL28,IL1a,IL11,IL12a,IL17RA,IL8,NFT3,IL6,IGFBP2,IL10,VEGFB,ONCOSTATINM,OSTEOPROTEGRIN,HGF,MCP1,ANGIOPOETIN1,TGFB3,IL15,IL14,LIF,GM-CSF

با روش ReaTime PCR بررسی و در دو محیط کشت حاوی FBS (گروه کنترل) و لیزات پلاکتی(گروه تست) باهم مقایسه شد. درنهایت داده‌ها بـا اسـتفاده از روش‌های آماری توصیفی، آزمون تفاوت میانگین برای گروه‌های مستقل و آزمون با تست t و محاسبه اختلاف بیان ژن ها با استفاده از نرم افزار Genex 6 و آنالیزهای آماری با استفاده از نرم افزار Spss 21 و ترسیم نمودار با graph pad prism 8 انجام گرفته است.