بررسی تغییرات متیلاسیون و بیان ژن RASSF2 آن در بافت توموری و حاشیه تومور بیماران مبتلا به سرطان کولورکتال

Abstract

سرطان کولورکتال یکی از شایع¬ترین سرطان¬ها با میزان مرگ و میر بالا است. RASSF2 یکی از 10 عضوRASSF است. از طریق تعامل با Ras GTPase، این پروتئین¬ها فرآیندهای سلولی متنوعی از جمله نقل و انتقال غشائی، آپوپتوز، مهاجرت و تکثیر را تنظیم می¬کنند. RASSF2 می¬تواند رشد سلولی را مهار کرده و آپوپتوز را القا کند. بر این اساس، از دست دادن بیان RASSF2 در تومورها و رده¬های سلولی سرطانی مختلف مشاهده شده است و چنین پدیده-هایی اغلب با هیپرمتیلاسیون پروموتر RASSF2 و پیش آگهی ضعیف برای بیماران همراه است. در این مطالعه میزان بیان این ژن و متیلاسیون آن در بیماران مبتلا به سرطان کولورکتال و رابطه آن¬ها با متغیرهای سن، استعمال دخانیات، سابقه خانوادگی، Stage و متاستاز بررسی شده است. مواد و روش¬ها در این پژوهش 75 عدد نمونه از بافت تومور و 75 عدد نمونه حاشیه تومور بیماران مبتلا به سرطان کولورکتال مورد بررسی قرار گرفت. پس از استخراج RNA (بوسیله ترایزول) از بافت-ها، سنتز cDNA انجام گرفت و از آن برای ارزیابی تغییرات بیان ژن RASSF2 بوسیله Real Time PCR استفاده گردید. همچنین، استخراج DNA از نمونه¬های بافتی انجام گرفت و بررسی الگوی متیلاسیون نواحی پروموتری RASSF2 با استفاده از تیمار bisulfite انجام گرفت. آنالیز آماری برای بررسی تغییرات بیان و متیلاسیون ژن RASSF2 و اثرات آن¬ها بر روی مشخصات کلینیکال بیماران انجام گرفت و pvalue<0.05 به عنوان سطح معنی¬داری در نظر گرفته شد. با استفاده از روش آماری ROC curve analysis پتانسیل بیومارکری بیان و متیلاسیون ژن RASSF2 به عنوان فاکتور تشخیص زودرس سرطان کولورکتال مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج نتایج بدست آمده مشخص کرده است ارتباط معنادار بین میزان بیان ژن RASSF2 در بافت سرطانی و بافت سالم وجود دارد، بطوریکه بیان ژن RASSF2 در بافت¬های سرطان کولورکتال از بافت¬های حاشیه تومور کمتر است. همچنین متیلاسیون در بافت¬های سرطان کولورکتال به وضوح بالاتر از بافت¬های سالم است.