بررسی میزان هورمون های جنسی و ژن های مرتبط با بلوغ اووسیت در تخمدان منجمد شده پس از پیوند در داربست فیبرینی به همراه سلول های اندوتلیال و ملاتونین در موش صحرایی

Abstract

انجماد و پیوند بافت تخمدان يكي از روش هاي حفظ باروري در زنان مبتلا به سرطان و نارسايي زودرس تخمدان می باشد. انجماد بافت تخمدان به سه روش انجماد آهسته، فوق سریع و شیشه ایی انجام می شود. فرآیند انجماد منجر به استرس شیمیایی و فیزیکی می شود که تغییرات مورفولوژیکی و آسیب میتوکندری در فولیکول ها ایجاد می کند. همچنین تاخیر رگزایی در طی پیوند می تواند باعث ایجاد ایسکمی و هایپوکسی و در نتیجه کاهش ذخاير فولیکول ها و آسیب بافت تخمدان شود. درکنار روش انجماد و ترکیبات ضد یخ استفاده شده، استفاده از آنتی اکسیدان ها، ایجاد زخم در بستر پیوند و در نهایت استفاده از هیدروژل های زیستی می تواند میزان موفقیت انجماد و پیوند بافت تخمدان را افزایش دهند. فلذا هدف ما در این مطالعه بررسی اثر القائی داربست فیبرینی به همراه سلول های اندوتلیال و ملاتونین بر میزان هورمون های پروژسترون و 17β- استرادیول و بیان ژن های9 GDF- و BMP-15 در بافت تخمدان پیوندی منجمد شده است.مواد و روش : موش های بالغ 8-6 هفته ای تحت شرایط بیهوشی کنترل شده و به ازای 80 میلی گرم بر کیلوگرم وزن بدن ماده بیهوشی کتامین و 10 میلی گرم بر کیلوگرم زایلازین به داخل صفاق تزریق شد. سپس در ناحیه کمری موش، شکافی در حد نیم سانتی متر ایجاد شده و تخمدان های عاری از چربی و مزانتر خارج گردید و در قطرات 100 میکرولیتری محیط کشتMEM –α حاوی %20 ,FBS قرار داده شد. انجماد بافت تخمدان با استفاده از روش انجماد شیشه ای انجام شد. برای ذوب کردن، تخمدان های منجمد شده در قطرات نزولی محلول‌های ساکارز 1، 5/0 و 25/0 مولار و DPBS قرار داده شدند. انکپسوله کردن تخمدان در هیدروژل فیبرینی همراه با سلول های اندوتلیال و ملاتونین انجام شد و در نهایت بافت تخمدانی به صورت زیر جلدی به همان موش ها به شکل اتوگرافت پیوند شدند. بعد از 14روز موش ها قربانی شدند و میزان هورمون های17β- استرادیول و پروژسترون با تکنیک الایزا و میزان بیان ژن های GDF-9و BMP-15 با استفاده از Real-time RT-PCR مورد ارزیابی قرار گرفت.نتایج : نتایج این تحقیق نشان داد که بیان ژن های GDF-9 وBMP-15 و سطح ترشح هورمون های 17β- استرادیول و پروژسترون در گروه تخمدان منجمد پیوندی به طور معنی داری کاهش یافت(P<0.05) و در گروه های تحت درمان انکپسوله شده افزایش یافت. این افزایش بیان ژن های GDF-9 وBMP-15 و سطح ترشح هورمون های 17β-استرادیول و پروژسترون درگروه تخمدان انکپسوله شده با هیدروژل فیبرینی به همراه ملاتونین و تخمدان انکپسوله شده با هیدروژل فیبرینی به همراه ملاتونین و سلول های اندوتلیال تفاوت معنی داری با گروه تخمدان منجمد پیوندی داشت (P<0.05). مقایسه بین گروه های تحت درمان نشان داد که بیان ژن های GDF-9 وBMP-15 و سطح ترشح هورمون های 17β- استرادیول و پروژسترون در گروه های حاوی ملاتونین نسبت به گروه دارای هیدروژل فیبرینی و هیدروژل فیبرینی به همراه سلول های اندوتلیال بیشتر بود و نیز تفاوت معنی داری بین تخمدان انکپسوله شده با هیدروژل فیبرینی به همراه ملاتونین و هیدروژل فیبرینی به همراه ملاتونین و سلول های اندوتلیال مشاهده نشد. در واقع حضور سلول های اندوتلیال در افزایش بیان ژن های GDF-9 وBMP-15 و سطح ترشح هورمون های 17β- استرادیول و پروژسترون تاثیر قابل توجهی نداشت