بررسی تاثیر مهار HSP70 در القاء آپوپتوز به واسطه نانوکورکومین پلیمری در رده سلولی A-375 ملانوما

Abstract

سرطان به عنوان یکی از مهم ترین عوامل مرگ در جهان شناخته میشود که سالانه حدود 10 میلیون نفر انسان را به کام مرگ میکشاند. ملانوما ، سرطان سلولهای ملانوسیت پوست میباشد که حدود 2.1 درصد از سرطانهای تشخیص داده شده در جهان را شامل میشود. روشهای درمانی مختلفی برای درمان این بدخیمی در نظر گرفته شده است و یکی از درمان های پیشنهادی که امید است در آینده به صورت گسترده در بالین مورد استفاده قرار گیرد ، استفاده از نانوکورکومین پلیمری می باشد . تحقیقات متعددی نشان داده اند که نانوکورکومین پلیمری میتواند در درمان سرطان ها و همچنین ملانوما نقش داشته باشد. پروتئین های شوک حرارتی دسته ای از پروتئین ها هستند که در شرایط استرس زای سلولی تولید شده و باعث تسهیل چین خوردن پروتئین ها و حذف پروتئین های بد تاخورده میشود که یکی از پروتئین های این دسته که وزن 70 کیلودالتون دارد ، پروتئین های شوک حرارتی 70 می باشد. فرضیاتی مطرح است که یکی از آنها این است که کورکومین در راستای القای آپوپتوز ، باعث بد تا خوردن پروتئین ها میشود و سلولهای سرطانی برای مقاومت در برابر اثر آن ، بیان پروتئین شوک حرارتی را افزایش میدهد و در مقابل فرضیه ای دیگر مطرح میکند که افزایش بیان پروتئین های شوک حرارتی در راستای القای آپوپتوز کورکومین عمل میکند.هدف مطالعه این است که مشخص شود در رده سلولی ملاونوما در پاسخ به تیمار نانوکورکومین پلیمری پروفایل بیان پروتئین شوک حرارتی 70 چه تغییراتی را محتمل میشود و آیا در راستای القای آپوپتوز است یا در جهت مقاومت سلولی. 2 مواد و روش ها : مطالعه آزمایشگاهی حاضر بر روی رده های سلولی A-375 ملانوما در محیط کشت DMEM حاوی %20 FBS و 10% پنسترپ انجام شد. آزمایش MTT انجام شد و 20000 و 7000 سلول A-375 به ترتیب در ساعتهای 24 و 48 در محیط کشت ، کشت داده شدند. محلول نانوکورکومین تهیه شد و پس از تست MTT، سلول‌های A375 با 13 میکرولیتر محلول نانوکورکومین در 24 ساعت و 12 میکرولیتر محلول نانو کورکومین در ساعت 48 تیمار شدند و در گروه کنترل فقط PBS به سلول‌ها اضافه شد. پس از استخراج RNA، یک جفت آغازگر تهیه شد و سپس cDNA از RNAها سنتز شد. سطح بیان پروتئین شوک حرارتی 70 (انواع A1 و (A2 توسط Real Time PCR بررسی شد. تست آپوپتوز انجام شد و میزان آپوپتوز توسط فلوسیتومتری بررسی شد. یافته ها : در نتیجه مشاهده شد که تیمار سلولهای ملانوما با نانوکورکومین پلیمری باعث کاهش بیان پروتئین شوک حرارتی 70 ( انواع A1 و A2 ) خواهد شد و این کاهش بیان ، در جهت القای آپوپتوز در این دسته سلولی می باشد.