بررسی اثر مهاری تلومراز و میتوکندری بر سلولهای بنیادی سرطان پستان و همزمان درمان با استفاده از سلولهای Natural Killer

Abstract

سرطان سینه سه گانه منفی (TNBC) به عنوان کشنده ترین و تهاجمی ترین سرطان سینه ویژگیهای سلول های بنیادی سرطانی (CSCs) مانند خودنوزایی، متاستاز زیاد و عود را نشان می دهند و به درمان های مرسوم مقاوم هستند. بنابراین درمانهای جدید نیاز است. هدف قرار دادن بیومارکر های اختصاصی ،سل تراپی و درمانهای ترکیبی درمانهایی هستند که در سالهای اخیر مورد توجه قرار گرفته اند. از آنجا که فعالیت تلومراز بالا در تومورزایی سرطان سینه نقش داردو تلومراز، به ویژه زیرواحد hTERT علاوه بر افزایش طول تلومر عملکرد های دیگری از جمله تاثیر برعملکرد میتوکندری، بیان ژن و آپوپتوز را نشان می دهد. بنابراین، ما با مهار تلومراز و میتوکندری میزان پرولیفراسیون، آپوپتوز، بیان ژنهای موثر بر آپوپتوز و همچنین بیان ژنهای DNMT3a ,ALDH و TET2 در TNBC ارزیابی کردیم. همچنین سلولهای کشنده طبیعی به عنوان اولین خط دفاعی سیستم ایمنی در برابر تومورعمل می کنند فعالیت سلولی NK با تعادل بین سیگنال های فعال کننده ومهار کننده که در سطح سلول بیان شده تنظیم می شود. بنابراین ما در این مطالعه توانایی مهار رشد سلولهایBCSCs با اثر NKcell KIR+ بررسی کردیم. مواد و روش¬ها: سلول های MDA-MB-231 و MDA-MB-468 با دوز IC50 BIBR1532، Tigcycline و ترکیبی از آنها تیمار شدند. سپس میزان آپوپتوز، تکثیر، طول تلومر و میزان بیان ژن¬ها و پروتئین¬های دخیل در آپوپتوز اندازه¬گیری شد. همچنین بیان DNMT3a، TET2 و ALDH مورد مطالعه قرار گرفت. علاوه بر آن ، سلولهای NK با سلولهای سرطان سینه کوکالچر شده و اثر سیتوتوکسیسیتی با CD107 , INFɣ مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج: نتایج ما نشان داد که مهار تلومراز و میتوکندری باعث مهار تکثیر و القای آپوپتوز در سلول های MDA-MB-231 و MDA-MB-468 می شود. با این حال، مهار تلومراز و میتوکندری به صورت کوتاه مدت (48 ساعت) تاثیر معناداری بر طول تلومر نداشت. در این مطالعه همچنین نشان داده شد که مهار تلومراز و میتوکندری باعث کاهش بیان ژن¬های hTERT و افزایش بیان پروآپوپتوتیک Bax، Bad و Bid و پروتئین¬های کاسپاز 3، 8، 9 و سیتوکروم C می¬شود. بیان آنتی آپوپتوتیک Bcl-2 و Bcl-xl تغییری نکرد. داده‌ها همچنین پیشنهاد کردند که مهار تلومراز باعث آپوپتوز بیرونی در MDA-MB-231 می‌شود در حالی که باعث آپوپتوز درونی در سلول‌های MDA-MB-468 می‌شود. علاوه بر این، مشخص شد که بیان p53 به دنبال مهار تلومراز و میتوکندری کاهش یافته و بر آپوپتوز سلول‌ها بی‌اثر است. بیان DNMT3a و TET2 در سلول‌های تحت درمان با سطح IC50 تلومراز و مهار میتوکندری افزایش یافت.و علاوه بر این، درمان ترکیبی بهتر از درمان با BIBR1532 و Tigcycline به تنهایی بود .در درمان سلولی سلولهای سرطان سینه با سلولهای NK KIR+ سیتوتوکسیسیتی افزایش داشت. بحث: مهار تلومراز و میتوکندری باعث آپوپتوز درونی و بیرونی و افزایش بیان DNMT3a و TET2 می شود وسلولهای NK KIR+ باعث افزایش سیتوتوکسیسیتی می شوند و می توانند در درمان سلولهای سرطان سینه TNBC مفید باشند .