بررسی اثر ترکیبی ایمونوتراپی با دندریتیک سل های پالس شده با لیزات تومور کولورکتال و مهار کننده CTLA-4 بر روی پاسخ سلول های T

Abstract

سرطان کولورکتال سومین سرطان شایع در سراسر جهان است که باعث وقوع حدود 935000 مرگ و میر در سال می شود و به عنوان دومین عامل اصلی مرگ و میر ناشی از سرطان در سال 2020 رتبه بندی شده است. ایمونوتراپی با استفاده از سلول های دندریتیک (DCs) می تواند روش مناسبی برای درمان انواع مختلف سرطان ها باشد. با این وجود، مکانیسم های سرکوب کننده سیستم ایمنی در ریز محیط توموری، مانند مولکول های ایمیون چک پوینت مهاری باعث کاهش اثربخشی پاسخ های ایمنی ضد تومور با واسطه DC ها می گردند. در میان مولکول‌های ایمیون چک پوینت مهاری، بیان cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4 (CTLA-4) در DC ها بلوغ و قابلیت ارائه آنتی ژن آنها را کاهش می دهد. هدف از این مطالعه، بررسی اثر siRNA اختصاصی علیه CTLA-4 بیان شده بر روی DC ها به همراه پالس کردن این سلول ها با لیزات تومور کولورکتال، بر روی پاسخ سلول های T به دنبال همکشتی سلول های T/DC می باشد. مواد و روش ها پس از جدا کردن سلول های تک هسته ای خون محیطی (PBMCs) با استفاده از محلول فایکول از خون محیطی اهداکنندگان، مونوسیت ها بوسیله خاصیت چسبندگی آنها به سطوح پلی استایرن جدا شدند. سپس مونوسیت ها با استفاده از granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF)، interleukine-4 (IL-4)، و lipopolysaccharide (LPS)، به DC های بالغ تبدیل شد. سپس این سلول ها با لیزات تومورکولورکتال پالس (mDC) و بیان CTLA-4 در آنها با استفاده از siRNA مهار شد (CTLA-4 silenced mDCs). برای بررسی اثر همکشتی CTLA-4 silenced mDCs، با سلول های T، در میزان تکثیر این لنفوسیت ها، از روش فلوسایتومتری استفاده گردید. به منظور بررسی اثر CTLA-4 silenced mDCs در میزان تولید سایتوکاین از لنفوسیت های T از روش الایزا استفاده شد. نتایج مهار بیان CTLA-4 در mDC ها به طور قابل‌توجهی بلوغ و فعالیت تحریکی آنها را بهبود بخشید. CTLA-4 silenced mDCs ظرفیت بالاتری برای تحریک تکثیر سلول های T CD3+ نسبت به mDC ها داشتند. co-culture سلول های T اتولوگ و CTLA-4 silenced mDC ها منجر به تولید سطوح بیشتری از IFN-γ و IL-4 از سلول های T نسبت به همکشتی سلول های T/mDCs شد.