: طراحی و ساخت نانو ایمونوحسگر بر پایه میکروفلویدیک کاغذی جهت تشخیص گاسترین_گلیسین با استفاده از قطعات آنتی‌بادی نوترکیب
Abstract
مقدمه: ابزار های آنالیزی میکروفلوئیدیک مبتنی بر کاغذ در سال های اخیر به عنوان یک فناوری تشخیصی جذاب ظاهر شده است. این ابزار از جهت ارزان قیمت بودن، زیست سازگار بودن، قابل حمل بودن و کاربری آسان مورد توجه قرار گرفته است. در این مطالعه، الگویی جهت تعبیه ریزکانال های آبگریز طراحی گردیده است و سپس اصلاح سطحی بستره کاغذ جهت تثبیت آنتی بادی‌های نوترکیب برای شناسایی نشانگرزیستی گسترین_گلیسین مربوط به سرطان روده با آرایش ساندویچی استفاده شده است. و در نهایت با بهره‌گیری از روش رنگسنجی به آشکارسازی پپتید نشانگر پرداخته شده است. و بعد از آن با استفاده از نرم افزار تهیه شده، اندازه‌گیری کمی میزان پپتید مد نظر اتفاق افتاد.
روش مطالعه: در این مطالعه طراحی و ساخت یک ابزار نانوایمنوحسگر که بر پایه‌ی میکروفلوئیدیک کاغذی برای تشخیص پپتید گاسترین_گلیسین گزارش شده است. طراحی و ساخت ریزکانال‌ها بر روی بستر یک تکه کاغذ کروماتوگرافی با دو روش برش لیزری و چاپ موم و ترکیب آنتی بادی‌های نوترکیب با آرایش ساندویچی جهت تشخیص نشانگر زیستی G17-Gly انجام شد. آنتی بادی منطقه متغیر زنجیره سبک اختصاصی انتهای گلسینه پپتید G17-Gly به صورت جذب و پیوند کووالانسی بر روی منطقه‌ی آزمایش تثبیت شد و با استفاده از تکنیک طیف سنجی تبدیل فوریه مادون قرمز اطمینال حاصل شد. قطعات آنتی بادی تک زنجیرهای اختصاصی ناحیه انتهای آمینی به نانوذرات طلا سنتز شده با اندازه تقریبی 25 نانومتری توسط یک لینکر پروتئین L متصل شد و نانوذره طلا طی مراحل مختلف اصلاح سطح توسط دستگاه اسپکتروفتومتر طیف جذبی، آنالیز پراکندگی نور دینامیکی، پتانسیل زتا و طیف سنجی مادون قرمز مورد آنالیز قرار گرفت. سپس پپتید G17-Gly در غلظت‌های مختلف تهیه شد و خطی بودن بین شدت سیگنال رنگی نانوذره طلا روی سطح کاغذ و غلظت پپتید G17-Gly در محدوده‌ی آستانه بالینی مربوطه که در حدود 1507 pg/ml در سرم فرد بیمار است مورد بررسی قرار گرفت. در نهایت مزایا و معایب دو روش ساخت μPAD و دو روش تبیت آنتی بادی نوترکیب بر روی بستر سیستم مقایسه و مورد بحث و بررسی قرار گرفت.
یافته‌ها: ابزار های آنالیزی میکروفلوئیدیک مبتنی بر کاغذ بر پایه سنجش با آرایش ساندویچی با نانوذره‌ی طلا با موفقیت برای تشخیص غلظت‌های مختلف نشانگر زیستیG17-Gly استفاده شد. نتایج معنادار مطابق با سیگنال رنگی حاصل از غلظت .... پپتیدG17-Gly بر روی ابزار μPAD ایجاد شد. اصلی‌ترین چالش رو‌به‌رو در این مطالعه، تغییرات ناخواسته به وجود آمده در فرم و رنگ کاغذ کروماتوگرافی در طی مراحل گوناگون آماده سازی سطح ابزار μPAD جهت تثبیت آنتی بادی نوترکیب( خصوصا روش پیوند کووالانسی) است. که در نهایت می تواند در آنالیز نتایج باعث بروز خطا شود.