طراحی روش مبتنی بر روش¬های مولکولی ایزوترمال جهت ردیابی سریع و دقیق سویه¬های استافیلوکوکوس‌اورئوس مقاوم به متی¬سیلین

Abstract

چکیده مقدمه: به دلیل شیوع بالای سویه¬های استافیلوکوکوس¬اورئوس مقاوم به متی¬سیلین MRSA) (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus; و مشکلات عدیده در کنترل عفونت¬های ناشی از آنها، تشخیص سریع این باکتری¬ها، دارای اهمیت است. حال آنکه روش-های¬ رایج تشخیصی برای این سویه¬ها، من جمله روش¬های مبتنی بر¬ کشت و آنتی¬بیوگرام، زمان¬بر بوده، همینطور روش¬های مبتنی بر¬ PCR نیز مستلزم صرف زمان و هزینه¬ اقتصادی بالا می¬باشد. هدف: هدف از این مطالعه، معرفی روش ایزوترمال LAMP (Loop-mediated Isothermal Amplification) می¬باشد که به عنوان روشی مقرون به صرفه برای شناسایی دقیق و سریع سویه¬های MRSA طراحی شده است. روش کار و مواد: تعداد 50 سویه استافیلوکوکوس¬اورئوس، در محیط کشت مولر هینتون¬ آگار کشت داده شده، سپس با انجام تست آنتی¬بیوگرام سویه¬های مقاوم به متی¬سیلین شناسایی و DNA آنها استخراج گردید. در مرحله¬ بعد با روش PCR ژن مقاومت به متی-سیلین یا ژن mecA در آنها ردیابی شد. سویه¬های دارای ژن mecA همچنین با روش LAMP مورد آزمایش قرار گرفتند. در نهایت حساسیت و اختصاصیت دو روش، با الکتروفورز روی ژل آگارز مقایسه گردید. یافته¬ها: تصاویر حاصل از الکتروفورز، اختصاصیت یکسان دو روش ولی سرعت و حساسیت بالای روش LAMP را نشان داد. (p value = 0.0001). نتیجه¬گیری: روش پيشنهادي LAMP به جهت مكانيسم متفاوت داراي حساسيت و سرعت بيشتري نسبت به روش PCR بوده و با هزینه¬ کمتری قابل اجرا می¬باشد.