طراحی نانوبیوسنسور مدل بر پایه رزونانس پالسمون سطحی با استفاده از قطعات آنتی بادیهای گاسترین-گالیسین

Abstract

مقدمه: یکی ازمشکالت پیش رو در جهان امروز، بحث بسیار مهم و حیاتی تشخیص بیماری سرطان میباشد. سرطان معده دومین علت مرگ و میرهای ناشی از سرطان را در جهان شامل میشود. بیومارکرها در تشخیص زود هنگام، ارزیابی پا سخ به درمان و پی شرفت تومور ب سیار حائز اهمیت میبا شند. غلظت باالیی از مارکر -G17 Gly در خون بیماران مبتال به سررطان معده شرناسرایی شرده اسرت. روو های مولکولی به دلیل هزینه باال و مراحل پیچیده تهیه نمونه برای شررناسررایی دچار چالش شررده اند. در این مطالعه تالو گردید تا با اسررتداده از خواص پال سمونیک نانو ذرات طال دو نانو پروب )آنتی بادی و با کتریوفاژ( با ح سا سیت باال برای سنجش -G17 Gly طراحی و ساخته شود. روش مطالعه: طی مطالعات قبلی قطعات آنتی بادیهای نوترکیب scFv و VL به ترتیب علیه ناحیه انتهای آمینی و انتهای گلیسررینه پپتید Gly-G17 به روو نمایش فاژی بیان و اسررتخراش شررده اسررت. ژن های کد کننده قطعات آنتی بادی scFv و VL به جای پروتئین پو ش شی شماره 3 فاژمید pITکلون شده اند. فاژهای نمایش دهنده آنتی بادی و همچنین قطعات آنتی بادی نوترکیب هر دو به عنوان پروب مورد بررسی قرار گرفت. برای این منظور ابتدا دونوع نانوذرهطال با پو شش سیترات و CTAB سنتز شد. آنتی بادیهای نوترکیب تو سط پروتئین لینکر به نانو ذرات با پو شش سیترات مت صل شدند. نانوذرات قبل و بعد از میان کنش با برر سی طیف جذبی، اندازه شعاع هیدرودینامیک، پتان سیل زتا و میکرو سکوپ الکترونی برای اطمینان از کیدیت آنها تعیین مشررخصررات شررد. غلظت پروتئین لینکر، غلظت آنتی بادیها، زمان انکوباسرریون و pH به عنوان عوامل اثرگذار مورد بررسرری قرار گرفت. سررپ از نانو ذرات با پوشررش CTAB برای اتصرراا الکترواسررتاتیک به باکتریوفاژها اسرتداده گردید. نانو ذرات قبل و بعد از میانکنش بوسریله طیف جذبی و میکروسرکوپ الکترونی مشرخصرهیابی شرردند. غلظتهای مختلف Gly-G17 در شرررایط بهینه شررده به هر دو نانوپروب ا ررافه و نتایا بر پایه کاهش شدت جذب بررسی شد. منحنی استاندارد در محدوده غلظتی ml/µg 7-1 برای نانو پروب آنتی بادی و محدوده ml/µg 5-1 برای نانو پروب باکتریوفاژ رسم شد. اختصاصی بودن هر دو نانو پروب بررسی گردید. یافتهها: پ از عاملدار سازی سطح نانو ذرات با آنتی بادیهای نوترکیب به دلیل تغییر ریب شکست محیط اطراف نانو ذره پیک های پالسررمونی نیز دچاره تغییر شرردند. افزایش سررایز و کاهش پتانسرریل زتا نانو ذرات عاملدار سرازی را نیز تایید کرد. به دلیل تجمع نانو ذرات در حضرور Gly-G17 رنگ محلوا کلویید از قرمز به آبی تغییر پیدا کرد. با افزایش غلظت باکتریوفاژ پیکهای پالسررمونی پهنتر شرردند و به سررمت طوا موشهای باالتر تغییر یافتند. نانو پروبهای طراحی شده با میزان LOD مشابه )ml/µg 1 )عملکرد مشابهی از خود نشان دادند. دلیل این امر را میتوان به ناپایداری باکتریوفاژها ن سبت داد. بطور کلی نتایا این تحقیق ن شان میدهد، که باکتریوفاژها بو سیله حذف مرحله ا ستخراش آنتی بادی و کاهش هزینهها میتوانند گزینههای بهتری ن سبت به آنتی بادیها به عنوان عنصر شناساگر باشند.