طراحی کیت حذف آلبومین با استفاده از مخلوط حلالها

Abstract

مقدمه: پلاسمای خون انسان غنی ترین مایع بدن است که اطلاعات بسیار مهمی در مورد وضعیت بدن، در بر دارد. وجود بازه ی غلظتی بسیار متغییری از پروتئین ها موجب پیچیده شدن روند شناسایی بیومارکرها شده است. اصلی ترین چالش پروئومیکس بازیابی بیومارکرهای پروتئینی در این سیستم پیچیده می باشد. HSA پروتئین غالب پلاسما می باشد و حدود 50% پروتئین های پلاسما را شامل می شود. وجود مقادیر بالای این پروتئین موجب اختلال در شناسایی بیومارکرها می شود. از طرفی این پروتئین به عنوان یکی از پر مصرف ترین داروهای بیمارستانی محسوب می شود و جهت استخراج HSA از پلاسمای انسان استفاده می شود. هدف: هدف این مطالعه پیدا کردن روشی ساده، سریع و مقرون به صرفه برای حذف HSA در یک فاز( بدون کاهش سایر پروتئینها) و استخراج آن در فاز دیگر می باشد. روش کار: پروتئین های پلاسما تحت شرایط دمایی و pH مختلف توسط حلالها، مخلوط حلال ها و فراکسیون های حجمی مختلف محلول اشباع (NH4)2SO4 ترسیب شدند. جهت بررسی مقدار پروتئین ها در دو فاز رسوب و محلول رویی از روش SDS-PAGE، بردفورد،SEC و نرم افزار quantity1D استفاده شد. طراحی آزمایش با استفاده از نرم افزارMinitab صورت گرفت. یافته ها: نتایج نشان می دهد که پس از افزودن مخلوط استون-اتانول تمامی پروتئین ها به جز HSA از محلول رویی پلاسما وارد فاز رسوب شده اند. این مخلوط حلال به همراه محلول اشباع (NH4)2SO4 (فراکسیون 40% V/V) بهترین نسبت برای حذف HSA از رسوب می باشد. نتیجه گیری: با استفاده از مخلوط حلال ها و فراکسیون های حجمی مختلف محلول اشباع (NH4)2SO4، تحت شرایط خاص دمایی انکوباسیون و سانتریفیوژ و PH مشخص، میتوان با هزینه ی پایین و کارآیی بالا حذف اختصاصی HSA و یا استخراج آن را انجام داد.