بررسی اثر نانو ذرات jetPEI حاوی siRNA اختصاصی PD-L1 در مهار بنیادینگی و تمایز لنفوسیت های T فعال شده به سمت تولید لنفوسیت های T تنظیمی القا شده

Abstract

هدف از این مطالعه بررسی اثر siRNA اختصاصی PD-L1 بر روند بقا، تکثیر، مهاجرت، ویژگی stemness و آپوپتوز در سلول های سرطانی TNBC در رده سلول های MDA-MB-231 است. مواد و روش ها به منظور ارزیابی اثر siRNA اختصاصی PD-L1 بر بقا و تکثیر رده سلول های MDA-MB-231، تست MTT و ارزیابی ژن c-Myc انجام گرفت. در ادامه برای بررسی اثر PD-L1-siRNA بر میزان بیان ژن و پروتئین PD-L1 از تکنیک های qRT-PCR و وسترن بلات استفاده شد. میزان مهاجرت سلول ها به روش wound healing assay، ارزیابی ویژگی stemness سلول ها از طریق Colony formation assay، بررسی آپوپتوز توسط رنگ آمیزی Annexin V-FITC/PI، ارزیابی چرخه سلولی و بررسی بیان سطحی مولکول PD-L1 به روش فلوسایتومتری انجام گرفت. همچنین به منظور بررسی بیان ژن های موثر در بقا و تکثیر، آپوپتوز، stemness و مهاجرت از تکنیک qRT-PCR استفاده شد. سپس به منظور بررسی اثر سرکوب بیان PD-L1 سلول های سرطان پستان بر پروفایل ژنی سایتوکاینی در لنفوسیت های T و بررسی تمایز آنها به لنفوسیت های تنظیمی، کشت همزمان لنفوسیت های T با این سلول ها انجام گرفت. یافته ها در سلول های MDA-MB-231 به دنبال ترنسفکشن با siRNA اختصاصی PD-L1، بیان ژن و پروتئین PD-L1 کاهش یافت. همچنین سرکوب بیان PD-L1 منجر به کاهش بقای سلول ها، افزایش آپوپتوز، مهار مهاجرت و کاهش توانایی stemness، کاهش بیان سطحی PD-L1 و توقف چرخه سلولی در فاز G1 شد. علاوه بر این، نتایج نشان داد که سرکوب بیان PD-L1 باعث کاهش چشمگیر بیان ژن های موثر در مهاجرت و stemness شد. همچنین نتایج کشت همزمان نشان داد که سرکوب بیان PD-L1 در سلول های سرطانی پستان، باعث افزایش عملکرد لنفوسیت های T افکتور با افزایش بیان ژن های سیتوکاین های التهابی شده و از طرفی دیگر باعث کاهش تمایز به لنفوسیت های T تنظیمی می شود.