بررسی الگوی مولکولی پاسخ ضدتکثیری و ضدمهاجرتی سلولهای اندوتلیال به تیمار با داروی ضدسرطان دوستاکسل

Abstract

سرطان یک بیماری کشنده است که با درگیر کردن بافت معده شناخته میشود. تغییرات ژنتیکی در ایجاد سرطان معده نقش مهمی دارد. علاوه بر تغییر در سطح DNA، تغییرات در سطح بیان MicroRNA ها نیز در فرآیند پیشرفت سرطان موثر می باشد. اثرات ضد سرطانی دوستاکسل (DTX) هم در in vivo و هم in vitro نشان داده شده است. از مکانیسمهای فرار سلول های سرطانی از جمله سلول های سرطانی سینه از سیستم ایمنی و نیز پیشرفت تومور در اثر رگزایی، ترشح اگزوزومهای حاوی فاکتورهای انکوژن و miRNA¬های (miR) موثر در بیان این فاکتورهاست.. علیرغم مشخص بودن عملکرد ضد سرطانی DTX، مکانیسم های مولکولی دقیق این اثرات مشخص نبوده و هدف از این مطالعه تعیین اثر این اسید چرب بر میزان بیان مولکولهای VEGF، miR-16 و miR-152 در آنژیوژنز در رده سلولی اندوتلیال می باشد. مواد و روش ها: رده¬ سلولی در محیط کامل کشت داده شد و پس از رسیدن سلول ها به فاز لگاریتمی، چهار گروه بدون تیمار، تیمار شده با DHA، تیمار با کلرید کبالت (CoCl2) و تیمار با DHA و CoCl2در نظر گرفته شد. پس از 24 ساعت مایع رویی سلول ها جهت استخراج اگزوزوم ها به وسیله اولتراسانترفیوژ جمع¬آوری شد. برای تایید استخراج اگزوزوم، عکس¬برداری به وسیله میکروسکوپ الکترونی TEM انجام شد و همچنین پس از استخراج پروتئین از اگزوزوم¬ها تست وسترن بلاتینگ جهت بررسی مارکر¬های سطحی اگزوزوم¬ها و تایید بیشتر استخراج اگزوزوم¬ها انجام شد. از اگزوزوم¬های تخلیص شده از گروه¬های مختلف و سلول¬ها RNA استخراج شد و cDNA سنتز شد. سطح بیان mRNA ژن VEGF و همین¬طور miR-152 و miR-16 از طریق آزمون qRT-PCR سنجیده شد. نتایج: نتایج این مطالعه نشان داد که تیمار با DTX باعث کاهش بیان VEGF و همچنین کاهش بیان miR-های مرتبط می شود