طراحی سازه ژنی بیانی کد کننده بواسیزومب و بررسی تاثیر آن در رده سلولی سرطان کولون

Abstract

مقدمه: درمان سرطان با روش ضد رگ زایی یک رویکرد امید بخش می باشد. داروی ضد رگ زایی بواسیزومب به فاکتور رشد اندوتلیال رگی A متصل و از اتصال آن به رسپتورش جلوگیری می کند که باعث مهار فرآیند رگ زایی می شود. توسعه آنتی بادی های مهار کننده رگ زایی موفقیت های چشمگیری داشته، اما کاربرد درمانی آن با توجه به تجویز چند باره دارو و عمر کم زیستی آنتی بادی در بدن محدود می باشد. هدف: در این مطالعه یک سیستم بر اساس ژن آنتی بادی ضد فاکتور رشد اندوتلیال رگی ایجاد شد که انتظار می رفت غلظت بالایی از آنتی بادی ضد فاکتور رشد اندوتلیال رگی در سلول سرطانی تولید نماید. روش کار: طراحی ، سنتز سازه بواسیزومب و کلون کردن در وکتور انتقالی pCDH جهت ترانسفکت و ساخت ذرات ویروسی حاوی سازه بواسیزومب در سلول های HEK-293 T انجام گرفت. ترانس داکشن سلو لها با روش های مولکولی qRT-PCR و وسترن بلات بررسی شد. فعالیت رگ زایی با تست تشکیل تیوب صورت گرفت. نتایج: سازه بواسیزومب با توالی T2A به هم متصل و در وکتور لنتی ویروس pCDH کلون شد. ذرات ویروسی بیان کننده بواسیزومب در سلول های HEK-293 T تولید شد. سلول های HEK-293 T به طور موثر ترانسداکت شده و آنتی بادی بواسیزومب فعال با بررسی در سطح mRNA و پروتئین به وسیله qRT-PCR و وسترن بلات به ترتیب تولید گردیدند. عملکرد مهاری بواسیزومب در سیستم هم کشت ارزیابی و تایید شد. نتیجه گیری: یافته های این تحقیق نشان داد سازه بیانی بواسیزومب باعث مهار رگ زایی در کشت همزمان سلول های سرطانی و اندوتلیال شده و قابل انجام در مدل های زنده می باشد.