طراحي روش جديد نانوبیوکانژوگاسیون به منظور رديابي بیو مولكولها بر اساس تشديد پلاسمون سطحي موضعي

Abstract

در این پروژه بیوكانژوگه های طلا به روش سبز سنتز شدند و قابلیت آن ها جهت ردیابی و شناسایی آنتی ژن بر اساس سه نوع سیستم های ردیابی نوری مورد بررسی قرار گرفت. در مرحله ی اول سنتز سبز نانوذرات طلا با استفاده از كیتوزان به عنوان احیاء كننده و پایداركننده انجام شد. تصاویر میکروسکوپ الکترونی (SEM) از این نانوذرات، نانوذراتی كروی با اندازه ای در محدوده ی nm 41 و تقریبا دیسپرس را نشان داد. همچنین نتایج حاصل از دستگاه تفرق دینامیکی نور (DLS) ، سنتز نانوذرات طلا با بار سطحی مثبت و پایداری مناسب را تأیید كرد. در ادامه، جهت طراحی سیستم شناسایی بر اساس رنگ سنجی در حالت محلول ( colorimetric ( و همچنین تشخیص بر پایه نقطه گذاری بر روی كاغذ ( paper-based dot-blot ( ، نانوذرات كیتوزان طلا با گلوتار - آلدهید، فعال و به آنتی بادی ها كانژوگه شدند. برای طراحی سیستم تشدید رزونانس سطحی موضعی بر پایه اسلاید شیشه ای ) glassslide-based LSPR ( ابتدا سطح شیشه با یک سیلان ) APTES (، فعال و به وسیله گلوتار آلدهید به عنوان لینکر نانوذرات به سطح شیشه متصل شدند. در مرحله بعد سطح نانوذرات دوباره به وسیله گلوتار آلدهید، فعال وآنتی بادی ها به آن ها كانژوگه شدند. همچنین اتصال آنتی بادی در همه روش ها تایید شد. درسیستم تشخیص بر پایه شیشه ) glasslide-based LSPR ( و همچنین رنگ سنجی در حالت محلول) colorimetric ( تغییر زیادی در پیک SPR جذبی نانوذرات در اثر اتصال آنتی ژن رخ نداد كه این می تواند به دلیل ضخامت بالای لایه كیتوزان در سطح نانوذرات باشد. اما در سیستم تشخیصی بر پایه كاغذ ( paper-based dot-blot (، نانو ذره كانژوگه به آنتی بادی به عنوان یک پروب سبز، توانست آنتی ژن مورد نظر را تا محدوده ی تشخیصی μg/ml 1 بدون هیچ روش تشدید سیگنالی و در مدت زمان كمتر از 15 دقیقه با اختصاصیت مناسب شناسایی كند. بر اساس نتایج بدست آمده، این روش می تواند به عنوان یک روش تأییدی در شناسایی آنتی ژن های پروتنینی با حساسیت و اختصاصیت مناسب عمل كند.