تعیین میزان نتیلاسیون و اندازه گیری سطح بیان ژنهای IL-10 و IL-6 در بیماران مبتلا به بهجت

Abstract

: اینترلوکین-10 بعنوان یک سایتوکاین تنظیمی، و اینترلوکین-6 بعنوان یک سایتوکاین پیش¬التهابی، بطور عمده توسط سلول¬های منوسیت، ماکروفاژها، سلول¬های B و آندوتلیالی تولید می¬شوند و نقش اساسی را در تنظیم التهاب بازی می¬کنند بطوریکه IL10 بعنوان کاهنده و IL6 بعنوان افزاینده¬ی التهاب نقش بازی می¬کنند. اگرچه در بیشتر بیماری¬های اتوایمیون مانند بیماری بهجت ثابت شده است که میزان بیان این ژن¬ها با روند بیماری در ارتباط می¬باشد ولی هیچ مطالعه¬ای در زمینه نقش اپی¬ژنتیک در تنظیم بیان این ژن¬ها در بیماری بهجت انجام نشده است. بنابراین هدف از این مطالعه بررسی میزان متیلاسیون و بیان ژن¬های IL10 و IL6 در افراد مبتلا به بیماری بهجت و مقایسه آن با افراد گروه سالم بود. مواد و روش کار: این مطالعه یک مطالعه مورد-شاهدی بود که بر روی 51 نفر بیمار و 63 نفر افراد گروه سالم انجام شد. در ابتدا سلول¬های تک¬هسته¬ای (PBMCs) جدا شدند. سپس DNA و RNA از تمامی نمونه¬ها طبق پروتکل استخراج گشته و به منظور بررسی میزان متیلاسیون پروموتر ژن¬ها از تکنیک MeDIP-qPCR استفاده شد. همچنین از نمونه¬های RNAی جداسازی شده، در ابتدا توسط پروتوکل RT-PCR سنتز cDNA انجام گرفت و به دنبال آن میزان بیان این ژن¬ها توسط روش Real-time PCR ارزیابی شدند. در نهایت به بررسی ارتباط میزان بیان ژن و متیلاسیون افراد بیمار با مشخصات کلینیکوپاتولوژیک آنها پرداخته شد. تمامی آنالیزها توسط نرم افزای SPSS20 مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. نتایج: یافته¬های مربوط به میزان بیان ژن IL10 و IL6 به ترتیب کاهش و افزایش آنها را در افراد گروه بیمار نسبت به گروه سالم نشان داد. همچنین میزان متیلاسیون پروموتر ژن IL10 در گروه بیمار بصورت هایپرمتیله و در گروه سالم بصورت هیپومتیله دیده شد. درحالیکه میزان متیلاسیون مربوط به IL6 کاملا برعکس بوده و در گروه بیمار نسبت به گروه سالم کاهش نشان داد. بحث و نتیجه¬گیری: با توجه به نتایج مربوط به میزان بیان و متیلاسیون IL10 و IL6 در این مطالعه، ممکن است که یکی از مکانیسم¬های تنظیمی دخیل در تنظیم بیان ژن، متیلاسیون پروموتر آن باشد.