تاثیر نیترات غیرارگانیک بر پارامترهای اسپرماتوزوئید، بیان ژن میکروریبونوکلئیک اسیدهای 34b و 449a، آپوپتوز و تغییرات بافتی و استریولوژیک در بیضه رت¬های نر دیابتیک نوع 1

Abstract

در این مطالعه، اثرات پیشگیری کننده و درمانی مکمل نیترات بر اختلالات بیضوی ناشی از دیابت در موش¬های صحرایی نر دیابتی مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش¬ها: در این مطالعه از 100 سر موش صحرایی نر نژاد ویستار (7-6 هفته) با وزن 85 تا 115 گرم استفاده شد. حیوانات به طور تصادفی به 10 گروه ده تایی تقسیم شدند: کنترل 2 ماهه، کنترل 3 ماهه، کنترل 2 ماهه¬ی دریافت کننده¬ی نیترات، کنترل 3 ماهه¬ی دریافت کننده¬ی نیترات، دیابت 2 ماهه، دیابت 3 ماهه، دیابت 2 ماهه¬ی دریافت کننده¬ی انسولین، دیابت 3 ماهه¬ی دریافت کننده¬ی انسولین، دیابت 2 ماهه¬ی دریافت کننده¬ی نیترات، دیابت 3 ماهه¬ی دریافت کننده¬ی نیترات. دریافت نیترات )با دوز mg/L100 در آب مقطر) و انسولین NPH (4-2 واحد) در گروه¬های مربوطه، به مدت 2 ماه انجام شد که در گروه¬های 2 ماهه بلافاصله پس از تایید دیابت و در گروه¬های 3 ماهه 1 ماه پس از القای دیابت شروع شد. دیابت با تزریق داخل صفاقی mg/kg45 استرپتوزوتوسین القاء شد. 3 روز پس از تزریق استرپتوزوتوسین حیوانات با قند خون بالای mg/kg 250 به عنوان دیابتی در نظر گرفته شدند. سطح گلوکز خون و وزن بدن در طول دوره¬ی مطالعه ارزیابی شد. غلظت سرمی انسولین، LH، FSH و تستوسترون توسط کیت الایزا محاسبه شد. میزان NOx (متابولیت¬های NO) سرمی توسط روش گریس تعیین شد. از real-time PCR برای بررسی تغییرات بیان a449miR- و b34miR- و ژن¬های 53P، 2Pacs و 4Pdcd در بافت بیضه استفاده شد. ارزیابی استریولوژی و هیستوپاتولوژی بافت بیضه و تعیین ایمونوهیستوشیمیایی شاخص آپوپتوزی آن انجام شد و پارامترهای اسپرم مورد بررسی قرار گرفت. یافته¬ها: القای دیابت موجب کاهش معنادار وزن، سطح سرمی انسولین، NOx و تستوسترون، پارامترهای بیضه و اسپرم، تحرک اسپرم، شاخص¬های اسپرماتوژنز، رتبه بندی جانسون، بیان miR-449a و تغییرات ساختار هیستوپاتولوژیک و استریولوژی بیضه شد درحالیکه قند خون، آپوپتوز سلول¬های زایا و لوله¬های اسپرم¬ساز، بیان miR-34b و ژن¬های Pacs2، Pdcd4 و P53 به طور معناداری افزایش یافت. در هر دو گروه دیابتی 2 ماهه و 3 ماهه¬ی دریافت کننده¬ی نیترات، کاهش معنادار میزان قند خون، میزان بیان b34miR- و ژن¬های 53P، 2Pacs و 4Pdcd، شاخص آپوپتوز توبولی و سلول زایا به همراه افزایش معنادار وزن بدن، انسولین و NOx سرمی، درجه بندی جانسون و میزان بیان a449miR- و بهبود پارامترهای بیضه و اسپرماتوزوئید، تغییرات مورفومتریک و استریولوژیک، شاخص¬های اسپرماتوژنز و ساختار بافت بیضه مشاهده شد که این اثرات در اکثر موارد بیشتر از اثرات انسولین بود. افزایش معنادار میزان تستوسترون سرمی نسبت به گروه دیابتی فقط در گروه دیابتی 2 ماهه¬ی دریافت کننده¬ی نیترات دیده شد.