تولید و خالص سازی آنتی بادی پلی کلونال بر علیه زنجیره سبک کاپای انسانی در خرگوش

Abstract

هدف از این مطالعه، بررسی تولید و خالص سازی آنتی بادی پلی کلونال بر علیه زنجیره سبک کاپای انسانی در خرگوش می باشد. در این مطالعه، ما IgG انسان را ازسرمPooled ، با کروماتوگرافی تعویض یونی تخلیص و احیاء کردیم. برای جداسازی زنجیره‌های سبک و سنگین از ژل فیلتراسیون و برای خالص‌سازی زنجیره سبک کاپا از کروماتوگرافی تمایلی با پروتئین L استفاده کردیم . پس از تولید کافی از زنجیره سبک کاپا خرگوش را ایمونیزه و تیتر آنتیبادی تولیدشده در خرگوش را با روش‌الایزا بررسی کردیم. میزان خلوص محصولات تولیدشده در هر مرحله با PAGESDS- ارزیابی شد.نتایج الکتروفورز PAGE SDS- در شرایط غیر احیاء وجود زنجیره‌های سبک 25 کیلو دالتونی را بعد از مراحل ژل فیلتراسیون و کروماتوگرافی تمایلی با پروتئین L، تائید کرد. همچنین آنتیبادیتولیدشده در بدن خرگوش نیز در شرایط احیاء دو باند 50 و 25 کیلو دالتونی را نشان داد که تائید کننده وجود IgGخرگوشی بود. با توجه به نتایج به‌دست‌آمده از تست الایزا تیتر کونژوگه تولیدی ما (IgGخرگوشی کونژوگه شده با HRP) 4000/1 تعیین شد. , Kappa and lambda chains are produced from B cells during the synthesis of immunoglobulins. FLCs (free light chains) play a key role in immune-responsive inflammation.The importance of light chains, which is the main goal of this study, light chain in a wide range of inflammatory and autoimmune diseases and leukemia (including kidney disease, rheumatoid arthritis, diabetes, heart disease, non-hodgkin's lymphoma, and HIV. This feature can be used to diagnose and predict disease progression, response to treatment. Polyclonal antibodies against Kappa light chain are used to diagnose diseases that produce FLC. FLC is used to examine a wide range of hematologic defects. Frequent evaluation of FLC during chemotherapy, due to their short half-life, provides the ability to check the real-time of fatal tumors. In this study, we purified and produced human IgG from Pooled serum with ion exchange chromatography. We used gel filtration to separate light and heavy chains, and to purify the Kappa light chain, byaffinity chromatographywith L-protein. After sufficient production of the Kappa light chain, the rabbit was immunized and the antibody titer produced in the rabbit was tested by ELISA method. The purity of the products produced at each step was assessed by SDS-PAGE. SDS-PAGE electrophoresis results in non-reduce conditions confirming the presence of 25 kDa light chain sequences after gel filtration and affinity chromatography. Also, the antibody produced in the body of the rabbit was also shown in terms of dual banding of 50 and 25 kDa confirming the presence of IgG of the rabbit. According to the results of the ELISA test, our conjugated titer (HRP conjugated IgG) was determined to be 1/4000.