سرکوب بیان ژن Snail 1 به وسیله RNA کوچک مداخله گر (siRNA) و بررسی اثر مهاری آن روی سلول های متاستاتیک سرطان مری

Abstract

سرطان مری هشتمین سرطان شایع و ششمین سرطان کشنده در جهان است. فاکتور رونویسی Snail1 منجر به القای EMT (epithelial–mesenchymal transition) در سلول های اپی تلیالی تومور می شود. پروسه ای که با پدیدار شدن تهاجم، و بدخیمی سرطان همراه است. هدف ما در این مطالعه بررسی اثر siRNA اختصاصی Snail1، بر حساسیت رده سلولی سنگ فرشی کارسینوم مری (TE-8) و بررسی تکثیر و مهاجرت این رده سلولی است.مواد و روش ها: رده سلولی TE-8 با siRNA اختصاصی Snail1 ترانسفکت شد. بیان نسبی mRNA ی Snail1، Vimentin و CXCR4 با روش qRT-PCR مورد بررسی قرار گرفت. برای تعیین بیان پروتئین Snail1 از روش وسترن بلات استفاده شد. برای ارزیابی تکثیر سلول TE-8 پس از کاهش بیان ژن Snail1 از روش MTT استفاده شد و همین طور تعداد سلول های آپوپتوز شده پس از کاهش بیان نیز با روش TUNEL مورد بررسی قرار گرفت و تست Wound healing هم برای این سلول با و بدون siRNA اختصاصی انجام شد.یافته ها: کاهش بیان Snail1 در سطح mRNA و پروتئین وابسته به دوز می باشد. که این کاهش بیان باعث مهار بیان Vimentin و CXCR4 در سطح mRNA شد. siRNA اختصاصی Snail1 به طور معناداری در مقایسه با گروه کنترل باعث کاهش بقا سلول TE-8 و افزایش آپوپتوز آن ها شد. بعلاوه سرکوب Snail1 با siRNA بطور معناداری باعث کاهش تکثیر و مهاجرت سلولTE-8 گردید. , Esophageal cancer is the eighth most occurrence, and the sixth most fatal cancer worldwide. The transcription factor Snail1 induces epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) in tumor epithelial cells, a process associated with the emergence of stemness, invasion and cancer malignancy. In this study, we aimed to clarify the effect of a specific Snail1 small interference RNA (siRNA) on sensitivity of TE-8 human esophageal squamous carcinoma cell line to investigate cell proliferation and migration.MethodsTE-8 cells were transfected with specific snail1 siRNA. Relative snail1, vimentin and CXCR4 mRNA expressions were measured by Quantitative real-time PCR. Western blot analysis was performed to determine the protein levels of snail1 MTT assay was used to evaluate the proliferation of TE-8 cells after down-regulation of Snail1 gene. The number of apoptotic cells was determined with the TUNEL assay. In vitro wound healing assay of TE-8 with or without snail1 siRNA was evaluated. ResultsIt was found that siRNA effectively inhibited snail1 expression at both mRNA and protein levels in a concentration-dependent manner and repress the expression of vimentin and CXCR4 at mRNA level. Down-regulation of snail1 diminished the survival rate of TE-8 cells. Compared with the control group, siRNA targeting snail1 significantly promoted cell apoptosis. Moreover, Knockdown of snail1 by siRNA significantly diminished the activation of cell migration.