مقایسه میزان تکثیر، مورفولوژی و ساختار بافت غضروفی حاصل از کندروسیت های کودکان و بالغین

Abstract

از سال‌های اخیر مهندسی بافت غضروف برای درمان بسیاری از بیماریها بکار میرود و در حال حاضر ایده آل ترین منبع سلولی در مهندسی بافت غضروف، کندروسیت ها هستند. اصلیترین محدودیت استفاده از کندروسیت ها، تعداد کم این سلول‌ها در بافت غضروف میباشد. این مطالعه به دنبال منبع سلولی مناسب با قدرت تکثیر بالا برای بدست آوردن تعداد کافی از کندروسیت ها است. به نظر میرسد که کندروسیت های بدست آمده از کودکان بعلت نابالغ بودن چنین ویژگی داشته باشند. لذا ما میزان تکثیر و مورفولوژی و ساختار بافت غضروفی حاصل از کندروسیت های افراد بالغ و نابالغ (از منبع انگشت اضافی کودکان پلی داکتیلی) را مورد بررسی قرار دادیم.مواد و روش‌ها: نمونه های بافت غضروفی بالغین به وزن 1 گرم از بیماران بالغ تحت عمل جراحی (65 سال به بالا) و نمونه بافت غضروفی کودکان از کودکان مبتلا به پلی داکتیلی (2 ماه تا 6 سال) تهیه شد. بعد از جداسازی و کشت سلول‌ها، قدرت تکثیر سلول‌ها با محاسبه DT و تست MTT برای هر دو سلول ارزیابی شد. سپس بافت غضروفی از هر دو نوع نمونه در 10 ورقه سلولی رویهم آماده شد. فیلم‌های غضروفی حاصل از کودکان و بالغین از طریق رنگ‌آمیزی بافت شناسی روتین و بیان کلاژن 2 از طریق رنگ‌آمیزی ایمونوفلوروسنت بررسی شدند.نتایج: نتایج DT و تست MTT نشان داد که قدرت تکثیر کندروسیت های کودکان به‌ طور معنیداری بالاتر از کندروسیت های بالغین است. یافته‌های بافت‌شناسی نشان داد که ورقه های سلولی در بافت غضروفی کودکان ضخیم تر است و ماتریکس خارج سلولی بیشتری بین لایه‌های سلولی در فیلم غضروفی حاصل از کودکان نسبت به بالغین تولید شده است. یافته‌های رنگ آمیزی ایمونوفلوروسنت نشان داد که بیان کلاژن نوع 2 در بافت غضروفی حاصل از کندروسیت های کودکان بیشتر از بافت غضروفی حاصل از کندروسیت های بالغین میباشد و کندروسیت ها در هر دو گروه فنوتیپ اصلی خود را حفظ کرده‌اند., In recent years tissue engineering is used for treatment many diseases. Ideal cell source for cartilage tissue engineering are chondrocytes. The main limitation of chondrocyte is the low number of cell in cartilage tissue. This study investigated a suitable cell source with high proliferation rate to obtain large number chondrocytes. It seems that the chondrocytes of children have such characteristics than elderly persons. Therefore, we compared proliferation rate, morphology and histologic structure of instructed cartilage from infant and adult chondrocytes.Methods: Adult cartilage tissue samples were obtained with weight of 1 gr from adult patients (65<age) undergoing surgical procedure, and infant cartilage tissue samples were obtained from polydactyly surgery waste (2 month- 6 years old). After isolation and expansion of chondrocytes, the proliferation rate was evaluated by calculating DT and MTT assay for both types of cells. Cartilage film was prepared in 10 sheets on both. The cartilage tissue film from infant and adult chondrocytes were evaluated histologically and by immunefluorescent staining collagen type 2.Results: DT and MTT assays revealed that the growth rate of the infant chondrocytes was significantly higher than adult chondrocytes. Histological findings showed that sheets were thicker in the cartilage film of infant chondrocytes and they had more extracellular matrix between the sheets of cells than the cartilage film of adult chondrocytes. The findings of the immunofluorescent staining of cartilage film indicated that collagen type II film of polyductily was more positive than adult chondrocytes. And chondrocytes in both groups preserved their phenotypes.