اثر ویتامین E برتکوین فولیکول های آنترال، میزان لقاح و تشکیل جنین از اووسیت های بدست آمده از تخمدان منجمد شده موش با روش انجماد شیشه ای

Abstract

تغییر شرایط فیزیکی و شیمیایی بافت تخمدان در طی انجماد موجب اکسیداتیو استرس و متعاقب آن باعث آسیب فولیکول‌ها میشود. برای جلوگیری از آسیب فولیکولی، افزودن آنتیاکسیدان‌هایی نظیر ویتامین E به‌ محیط کشت ضروری است؛ بنابراین هدف از این مطالعه ارزیابی تأثیر حفاظتی ویتامین E بر بلوغ فولیکول‌های آنترال و تکوین جنین‌های حاصل از تخمک‌های بدست آمده از تخمدان منجمد شده موش میباشد.روش: موش‌های ماده نژاد Balb/c بعد از دریافت 10 واحد بین‌المللی داروی PMSG با روش جابجایی مهره‌های گردن کشته و تخمدان‌هایشان به‌صورت تصادفی به سه گروه کنترل یا غیر انجمادی، انجمادی 1 و انجمادی 2 تقسیم شدند. بعد از انجام مراحل انجماد و ذوب بافت تخمدان مطالعات زیر انجام گرفت:مطالعه اول: مقایسه مورفولوژیکی و فراساختاری بافت تخمدانی در دو گروه انجمادی با میکروسکوپ نوری و الکترونی. مطالعه دوم: اثر ویتامین E بر میزان بلوغ فولیکولی (تخمک MII)، فولیکول‌های آنترال حاصل از بافت تخمدان منجمد شده و غیر انجمادی به‌صورت مکانیکی خارج‌شده و در محیط کشت -MEM با و بدون ویتامین E (آلفاتوکوفرول M100) کشت داده شدند.مطالعه سوم: اثر ویتامین E بر میزان باروری و تکوین جنین (دوسلولی تا بلاستوسیست) مورد بررسی قرار گرفت.نتایج: نتایج مطالعه اول نشان داد که مورفولوژی و فراساختار فولیکول‌ها در گروه‌های انجمادی حفظ‌شده بود هرچند که تغییراتی در میتوکندری سلول‌های گرانولوزا مشاهده شد.نتایج مطالعه دوم نشان داد که غنیسازی محیط کشت با ویتامین E باعث بهبود قابلیت زنده ماندن و رشد فولیکول‌های آنترال و همچنین افزایش میزان تخمک‌های MII به‌طور معنیدار میشود.نتایج مطالعه سوم نشان داد که در محیط کشت غنیشده با ویتامین E درصد لقاح، جنین دو سلولی، چهار سلولی و بلاستوسیست به‌طور معنیداری بالاتر از گروه‌های انجمادی فاقد ویتامین E بود (01/0P<)., The aim of this study was to evaluate the effects of preventive vitamin E (-tocopherol) on antral follicle development and embryogenesis of oocytes obtained after vitrification of mouse ovarian tissue.Methods: Female Balb/c mice were sacrificed by cervical dislocation after the injection of PMSG (10 IU) and their ovaries were randomly divided to three groups: control or non-vitrified (n=10), vitrification 1 (5, 10% EG +5, 10% DMSO) (n=15), vitrification 2 (10, 15% EG +10, 15% DMSO) (n=15) with ascending concentration of cryoprotectants. After toxicity tests and vitrificatin- warming, mechanically isolated antral follicles were cultured in -MEM medium that supplemented with or without of -tocopherol (100 M). The follicular maturation rates and embryo development was collected and assessed. Also the viability, morphology and ultrastructure of derived antral follicles from vitrified ovaries was analyzed.Results: The morphology and ultrastructure of follicles was well preserved in the vitrified groups and -tocopherol supplementation of culture media increased significantly the proportion of oocytes reached metaphase II, blastocyst rates compared to non--tocopherol supplemented media (P<0.01).