اثر گلورونات سدیم بر میزان بیان micro RNA-146a و مولکول های IRAK1 و TRAF6 در رده سلولیHEK-Blue-hTLR4

Abstract

التهاب پاتولوژیک بخش جدایی ناپذیر بیماری های مختلف به ویژه سرطان و بیماری های خود ایمنی است. تاکنون miRNA های زیادی بعنوان تنظیم کننده سیستم ایمنی، التهاب و انتقال پیام TLR شناخته شده است. miR146a یکی از تنظیم کنندگان منفی مسیر سیگنالینگ TLR4 است که با هدف قرار دادن دو مولکول IRAK1 و TRAF6 عمل می کند. G2013 یک داروی جدید ضد التهابی و غیر استروئیدی است که در مدل موشی مالتیپل اسکلروزیس بسیار موثر واقع شده است. هدف از این مطالعه بررسی اثرات G2013 بر میزان بیان miR146a و مولکول های هدف آن بعد از تیمار سلول ها بوده است. مواد و روش ها: سمیت سلولی G2013 توسط تست MTT تعیین شد. تغییرات میزان بیان miR146a در سلول های تک هسته ای خون محیطی و مولکول های هدف IRAK1 و TRAF6 در رده سلولی HEKBlue293-hTLR4 با استفاده از RealTime PCR در حضور و عدم حضور لیپو پلی ساکارید تعیین شد. IC50 دارو G2013 برابر با g/ml 25 تعیین شد و بنابراین دوزهای g/ml 25 و g/ml 5 برای تیمار های بعدی انتخاب شد.یافته ها: نتایج این تحقیق نشان داد که. در ادامه تیمار با دو دوز بالا و دوز پائین نشان داد که میزان بیان IRAK1 بین 5 تا 8 برابربعد از درمان با G2013 به صورت وابسته به دوز کاهش یافته است (p<0.0001). میزان بیان TRAF6 نیز 3 تا 10 برابر به ترتیب در دوز های پائین و بالا کاهش نشان داده است(p<0.001). , Inflammation is inseparable part of different disease especially cancer and autoimmunity. MiR-146a has been identified as regulatorsof immune system, inflammation and TLR especially TLR4 signaling via targeting IRAK1 and TRAF6. G2013 is a novel designed non-steroidal anti-inflammatory drug which was recently shown to be effective in experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) mouse model. The aim of this study was to evaluate G2013 effects on miR-146a and its molecular targets.Material and Methods: For this purpose cytotoxicity of G2013 evaluated by MTT assay. Expression level of miR-146a in PBMCs and IRAK1 along with TRAF6 in HEK-293 TLR4 cells determined using real time PCR. Our results showed that G2013 IC50 was 25g/ml, thus 5 and 25 g/ml concentrations used for further treatments as low dose and high dose concentrations.Results: Our results showed that miR-146a expression was not affected after treatment withlow dose and high dose of G2013. IRAK1 expression reduced between 5 to 8 fold aftertreatment by G2013 in a dose dependent manner (p<0.0001). In paralell TRAF6 expressiondeclined between 3 to 10 fold dose dependently (p<0.001).