بررسی میزان بیان Apaf-1، Caspase-3، Bax و Bcl-2 در سلولهای صفاقی موش‌های سوری در مجاورت با مایع کیست هیداتید

Abstract

این مطالعه با هدف تعیین اثر آپوپتوتیک مایع کیست هیداتید بر سلولهای صفاقی موش سوری در شرایط درون تنی در موش‌های سوری انجام گرفته است.مواد و روش ها: برای بررسی اثر آپوپتوتیک مایع کیست هیداتید روی سلولهای صفاقی موش سوری، ابتدا کبد گوسفند آلوده به کیست هیداتید از کشتارگاه به آزمایشگاه منتقل گردید. ابتدا سطح خارجی کیست با الکل 70 درصد تمیز شده و سپس با استفاده از سرنگ، مایع کیست و پروتواسکولکس های آن به طریق استریل در لوله های 50 میلی‌لیتری جمع آوری شد. پس از 2-3 دقیقه پروتواسکولکس های بدست آمده با تریپان‌بلو رنگ آمیزی شد و برای بررسی در حیوانات آزمایشگاهی مورد استفاده قرار گرفت. 8 عدد موش سوری ماده در محدوده سنی 12-8 هفته از طریق تزریق درون صفاقی آلوده شدند. حیوانات مورد بررسی با تزریق 2 سی سی مایع کیست اکینوکوکوس گرانولوزوس، آلوده شدند و گروه کنترل نیز با تزریق 2 سی‌سی از سرم فیزیولوژی مورد آزمایش قرار گرفت. در ادامه سلولهای صفاقی آلوده شده با مایع هیداتید، جدا شده و برای بررسی بیان ژن های پروآپوپتوتیک Bax، آنتی آپوپتوتیک Bcl-2 و همچنین ژن های Apaf-1 و Caspase-3 در سطح mRNA مورد ارزیابی قرار گرفت. بدین منظور ابتدا RNA سلولهای با کیت یکتا تجهیز آزما (کیت استخراج RNA) جدا گردید سپس توسط کیت یکتا تجهیز آزما سنتز DNAc انجام شد. در نهایت با استفاده از cDNA حاصله به روش RT-PCR میزان بیان Caspase-3، Bcl-2 ، Bax و Apaf-1 با توجه به میزان بیان GAPDH به روش نیمه کمی مورد بررسی قرار گرفتند.یافته ها : نتایج حاصل نشان می‌دهد که بیان ژن های القا کننده آپوپتوز Apaf-1، Caspase- 3 و Bax به طور معنی داری افزایش یافته و بیان ژن آنتی آپوپتوتیک Bcl-2 کاهش یافت. بیشترین افزایش بیان ژن های القا کننده آپوپتوز در ژن های مواجه شده با مایع هیداتید حاوی پروتواسکولکس مشاهده گردید.